··抗血脂、降压活性·
诺丽的保健功效—国际最新研究进展论文集
中国医学研究与临床.2008, 6(8): 4-7.诺丽果汁对左旋精氨酸诱导实验性高血压大鼠降压作甩的研究
诺丽果汁对左旋精氨酸诱导实验性高血压大鼠降压作
用的研究
马德禄, 高建华, 刘印忠
（天津医科大学基础医学院药理教研室 天津300070）
摘要
目的 了解和探讨大溪地诺丽果汁（Tahitian Noni Juice，TNJ）对实验性高血压作用和机制。方法 利用N-硝基左旋精氨酸（L-NNA）诱导大鼠形成实验性高血压模型，并在此基础上观察和评价TNJ的降压作用，初步研讨其抗高血压作用机制。结果 L-NNA连续4周腹腔注射给药，可引起大鼠平均动脉压明显升高，由（[92.9±l1.0）升至（137±12.2）mmHg，P
诺丽Noni（Morinda citrifolia）是一种茜草科草本植物，已经被玻利尼西亚人广泛用于民间药物使用超过2000年。据报道，Noni无论是对人体的癌症、感染、关节炎、糖尿病、气喘、高血压和疼痛，还是实验动物模型都具有广泛的治疗效果[1,2]。大溪地诺丽果汁（Tahitian Noni Juice，TNJ）是Noni树的果子榨成的果汁液，产自大溪地群岛。近年来，它作为一种具有医疗保健作用的饮品在全球普及率呈显著的上升趋势。为了深入研究TNJ的抗高血压机制，本文采用Wistar大鼠，使用一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基左旋精氨酸(L-NNA)制作大鼠高血压模型，测定高血压大鼠血浆中的NOS、内皮素，从科学角度探讨和分析TNJ抗大鼠高血压的机制。 1 材料与方法 1.1 材料
1.1.1 动物 雄性Wistar大鼠，10周龄，体重150～170g，由中国医学科学院放射医学研究所提供（动物合格证号为：SCXK（京）2005-00 1）。
1.1.2 药品 N-硝基左旋精氨酸（L-NNA），由美国SIGMA 公司生产；卡托普利片（Captopril Tabiets，CTa），由中美上海施贵宝制药有限公司生产；一氧化氮合酶（NOS）测定试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；内皮索（Endothelin，ET）放射免疫分析药盒，由北京北方生物技术研究所生产。
1.1.3 被测物TNJ由大溪地诺丽国际公司提供。
1.1.4 仪器 BP-6无创动物血压测定系统，通用8通道信号采集处理系统，恒温控制脉搏探测阻断一体箱，均由成都泰盟科技有限公司生产；Vis-7220型可见分光光度计，由北京瑞利分析仪器公司生产；GC-12007放射免疫计数器，由科大创新股份有限公司中佳分公司生产；B80-型低速自动平衡离心机，由河北省安新县自洋离心机厂生产；FA2104型万分之一电子分析天平，上海精密科学仪器有限公司生产。 1.2 方法
1.2.1 分组 雄性Wistar大鼠48只，实验前正常饲养1周，随后随机分组，将其分为空白组（NS）、模型组（L-NNA）、阳性对照组（CTa）、果汁小剂量组（TNJ 6g/kg体重）、果汁中剂量组（TNJ 12g/kg体重）、果汁大剂量组（TNJ 24g/kg体重），每组8只，分笼饲养，喂以普通饲料、普通水。
1.2.2 大鼠高血压模型的制备 采用NOS抑制剂L-NNA制备大鼠实验性高血压模型，每天腹腔注射L-NNA，15mg/kg体重，分2次腹腔注射，上午8：30分和下午3：30分各1次，连续腹腔注射4周共计28d。
1.2.3 预防和治疗大鼠高血压在制备 实验性高血压模型的同时进行预防和治疗，在上午9：00，NS组和L-NNA组灌胃生理盐水0.2ml/100g体重，CTa组灌胃卡托普利2.5mg/kg体重，果汁小中大剂量组分别灌胃TNJ 6g/kg体重、TNJ 12g/kg体重、TNJ 24g/kg体重，给药1次/d，连续给药4周共计28d。
1.2.4 一氧化氮合酶(NOS)测定方法 使用南京建成生物工程研究所的一氧化氮和酶（NOS）测定试剂盒测定。
1.2.5 内皮素（ET）的测定方法 使用北京北方生物技术研究所的内皮素放射免疫分析药盒测定。
1.2.6 观察指标（1）心脏指数：大鼠称重，再将其颈部脱臼处死，打开胸腔，摘取心脏，NS冲洗干净，滤纸滤干，置于万分之一天平中称重，并计算心重（HW）/体重（BW）比。计算公式：心脏指数=HW/BW×1000；（2）体重变化情况（g）：大鼠在实验过程中每周的体重变化情况；（3）平均动脉压（MAP），收缩压（SPB）和舒张压（DPB），每项指标均测3次取平均值。MAP=（SPB-DPB）/3+DPB；（4）心率（HR）：大鼠每分钟心跳的次数；（5）血中NOS的活力；（6）血中ET的含量。
1.2.7 实验步骤 6组实验大鼠，除NS组外，其余各组2次/d腹腔注射L-NNA，早8：30和下午3：30，连续4周28d。与此同时，每天上午9：00给NS组和L-
1、INA组灌胃NS，CTa组灌胃CTa，TNJ小中大剂量组分别灌胃TNJ-L 6g/kg体重、TNJ-M 12g/kg体重、TNJ-H 24g/kg体重，连续4周28d。于实验前及开始后每周称体重并以BP-6无创动物血压测定系统测量大鼠尾动脉SPB、DPB和心率并计算出MAP。第29天测SPB、DPB和心率后，将大鼠眼内眦取血1.5ml，用于测血中NOS活性和ET的含量，随后将大鼠称体重，以脱臼法处死动物，取心脏称重，计算出心脏指数。
1.2.8 数据处理实验数据以用SPSS 11.5统计软件进行数据分析。数据资料用（±sD）表示，两组指标比较用t检验。 2 结果
2.1 TNJ对第4周高血压大鼠收缩压、舒张压、心率、心脏指数的变化见表1。
表1 TNJ对第4周高血压大鼠SPB、DPB、HR、HW/BW的影响( ±s) 组别 NS L-NNA CTa TNJ-L TNJ-M TNJ-H SPB(mmHg) 106±12.5** 155±15.9 112±10.9** 121±9.82** 125±25.5* 123±8.72**
DPB(mmg) 86.6±11.0** 128±10.9 96.6±12.4** 99.9±10.7** 107±19.2* 103±9.30**
HR(次/min) 335±25.6 307±50.3 335±41.8 332±14.1 345±44.8 338±57.4
HW/BW×1000 3.06±0.15** 3.79±0.28 2.81±0.11** 3.35±0.27** 3.14±0.26** 3.03±0.31** 注：与L-NNA组比较 *P
2.2 TNJ对1～4周高血压大鼠体重变化（g）的结果见表2。
表2 TNJ对1~4周高血压大鼠体重变化(g)的影响( ±s) 组别 NS L-NNA CTa TNJ-L TNJ-M TNJ-H 0周 176±104 175±9.60 176±8.25 175±9.65 175±9.85 175±9.02
1周 185±10.4 176±11.7 182±12.8 182±12.3 179±10.5 180±11.5
2周 217±16.7** 193±15.2 210±22.6 210±13.5* 212±16.6* 208±18.6**
3周 246±15.8* 216±8.50 236±24.2 234±18.3* 234±22.1* 236±21.0**
4周 269±16.9** 238±18.8 263±16.2* 257±14.9* 258±17.9* 260±17.3* 注：与L-NNA组比较*P
2.3 TNJ 对1~4周高血压大鼠平均动脉压（mmHg）的数据结果见表3。
表3 TNJ对1~4周高血压大鼠MAP（mmHg）的影响( ±s) 组别 NS L-NNA CTa TNJ-L 0周 89.1±9.91 89.2±7.38 89.9±8.24 89.5±3.85
1周 93.3±8.71** 122±8.83 104±6.04** 120±3.78
2周 90.8±8.78** 128±13.3 110±13.9* 114±12.5
3周 89.1±11.1** 131±6.70 104±5.24** 114±14.3*
4周 92.9±11.0** 137±12.2 102±11.7** 107±9.59** TNJ-M TNJ-H 90.1±4.26 90.4±2.39
115±13.0 114±14.1
107±10.3** 109±7.89**
116±10.6** 114±10.2**
112±18.0 109±8.85** 注：与L-NNA组比较*P
2.4 TNJ对4周高血压大鼠一氧化氮合酶和内皮素的数据结果见表4。
表4 TNJ对4周高血压大鼠NOS和ET的影响( ±s) 组别 NS L-NNA CTa TNJ-L TNJ-M TNJ-H
总NOS活力(U/ml) 77.1±23.3** 42.5±19.3 79.3±13.0** 43.9±18.0 51.8±16.6 60.8±10.5*
iNOS活力(U/ml) 25.7±7.72** 12.5±7.75 26.6±4.07** 13.3±7.29 17.1±5.38 21.1±3.18*
ET(pg/ml) 56.7±9.86** 98.3±14.9 75.6±7.02** 86.4±9.15 76.8±9.65** 71.7±12.8** 注：与L-NNA组比较*P
3 讨论
近年来，细胞生物学和分子生物学研究表明，血管内皮细胞合成和释放多种血管活性物质进而实现血管平滑肌的收缩和舒张，主要包括内皮衍生舒张因子（EDRF）和内皮衍生收缩因子（EDCF）等。其中EDRF的最终效应因子一氧化氮（NO）和EDCF中的内皮素（ET）是一对依赖于血管内皮的舒张和收缩因子，两者的平衡，有利于正常血管张力的维持和稳定[3]。
肾素-血管紧张素一醛固酮系统（RAS）中的肾素是由肾分泌的，具体来说是由肾小球中的入球小动脉上的近球细胞分泌，它最重要的作用就是可以激活血管紧张素原变成血管紧张索I（AI）。血管肾张索是由肝脏分泌的，被肾素激活后，变成AI，它起到缩血管的作用，AI可以被酶分解变成血管紧张素Ⅱ（AⅡ），它能缩血管以及促进醛固酮的分泌，醛固酮可以促进肾对水的重吸收，AⅡ可以被酶分解变成血管紧张素Ⅲ（AⅢ），它也有促进醛固酮的分泌的作用。正常情况下，由于肾素分泌很少，血中血管紧张素也少，对血压调节不起明显作用。但当大失血时，由于动脉血压显著下降使肾血流量减少，血管紧张素生成增多，对防止血压过度下降而使血压回升却起重要作用。肾血管长期痉挛或狭窄的患者，因肾血流量减少，血管紧张素生成增多可导致肾陛高血压。
内皮素（endothelin，ET）是一种具有持续血管作用的内皮衍生多肽，是迄今为止所知的缩血管物质中作用最强的一种，被命名为ET，分为ET-1，ET-2，ET-3三种异性肽，其中ET-I是血管内皮细胞产生的这一家族中的主要成员，其引起的血管收缩、心肌缺血、代谢紊乱和细胞增殖是与血管损伤有关疾病的共同致病因素，还可刺激RAS系统的作用。研究表明，内源性的ET-I是通过激活血管平滑肌上的ETA受体发挥控制基础张力及血压的作用，同时又通过ETB受体发挥促NO形成作用而阻止血管收缩[5]。本实验中，我们应用了L-NNA诱导大鼠产生实验性高血压，L-NNA是一种非选择性的一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂[4]，可以抑制所有3种NOS，进而阻断NO的生成，它直接的结果就是破坏了EDRF和EDCF之间的平衡状态，这样ET收缩血管的作用由于缺少了对抗它的NO而被强化[6]，如前所述其最终的结果导致模型组大鼠血管收缩，外周阻力上升，SPB、DPB、MAP明显升高，故本研究的高血压模型是成功的。
卡托普利（CTa）是作用于RAS系统的药物，抑制血浆中RAS，抑制局部组织RAS，在血浆和局部组织均抑制血管紧张素转换酶（ACE）的活性，抑制AI转换成AⅡ，因而使AⅡ及肾上腺皮质球状带释放的醛固酮减少；抑制缓激肽降解促进前列腺素合成减少，可以逆转心肌肥厚及长期应用可产生抗交感神经作用。本实验应用卡托普利作为阳性药，治疗高血压模型大鼠，与单纯高血压模型组大鼠比较血压降低、心脏指数下降、血浆NOS和iNOS升高、ET降低、大鼠体重增加，证明了其药理作用。
本实验中TNJ作为预防和治疗高血压模型来观察其作用，结果显示TNJ与卡托普利具有相似的作用，与单纯高血压模型大鼠比较血压降低、心脏指数下降、血浆NOS和iNOS升高、ET降低，说明TNJ对用NOS抑制剂L-NNA引起的大鼠高血压、心脏肥厚有一定的治疗和预防作用，对L-NNA引起的血浆NOS、iNOS降低和ET升高有一定的对抗作用。所以说诺丽果汁的预防和治疗高血压作用机制可能与恢复NOS活性有关。
