单位及实验室名称 项 目
汉源县人民医院检验科 血液及骨髓标本的细菌学检验操作 编号：LAB/SOP/HY/微-001 日期：2010年5月3日
版本：第一版，第0次修订
第1页，共3页
一、【标本采集】
1.血液采集：（1）以无菌方法采血，采出的血液标本立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使之充分混匀，以防止凝固。 （2）采血量：增菌液与血液标本比例为5-10：1，成人一次采血8-10ml，婴幼儿1-5ml。
2.骨髓标本：（1）采集部位及时间：一般用骨髓穿刺针从髂骨采集骨髓标本，最好在用药前，发热患者要在发热初期或高热期采集标本。 （2）标本采集要严格无菌操作，增菌与运送同血液标本。
二、【检验方法】
1.培养：标本接种于肉汤增菌液后，立即置35℃孵箱内孵育，每天观察培养液内有无混浊、沉淀菌膜、色素颜色变化等。 肉汤出现变化 怀疑菌种 混浊 革兰氏阴性杆菌 均匀混浊，有绿色荧光 绿脓杆菌 上面澄清，下面沉淀 链球菌 自下而上溶血现象 溶血性链球菌 肉栋样凝固 葡萄球菌
表面有灰白菌膜 枯草杆菌或类白喉杆菌
1 2.检验：对有细菌生长迹象的血培养瓶应及时做如下检验
（1）以无菌操作挑取培养物涂片进行革兰氏染色镜检，一旦有细菌生长可向临床作初步报告。
（2）同时转种于血平板或其它培养基进行分离培养。
（3）根据菌落特征及菌体染色镜检形态，进行常规生化反应，同时做药敏试验。
三、【检验程序】
血液、骨髓
↓
增菌培养（需氧及厌氧）
↓
———————————————————————————— ↓ ↓ ↓ 涂片染色镜检 分离培养 直接药敏试验 ∣ ↓
（35℃ 4-6小时）初步报告
↓
↓ ↓ 需氧培养及CO2环境培养 厌氧培养（血平板
等分离培养基）
（血琼脂平板和巧克力平板）
2 ∣——————————菌落观察—————————∣
↓
↓ ↓ 涂片、革兰氏染色镜检
纯培养
↓
———————————————————
↓ ↓
血清学检查→确定报告←生化反应试验、药敏试验
四、【结果报告】
1.根据增菌液培养结果直接直接涂片、染色、镜检确属致病菌时可向临床做初步报告，最后根据细菌鉴定结果及药敏试验及时向临床报告。
2.培养7天无菌生长时，可报告为“经7天培养无细菌生长”。对于亚急性心内膜炎患者标本应培养1个月，才能做出报告。
3.菌血症、败血症的诊断标准：（1）两次培养均出现同一细菌（可排除污染）；（2）发病2周后血中抗体滴度增高。
作者：肖德慧
时间：2010-5-3 3
