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如何确保血凝试剂的稳定性

发布时间:2020-03-02 07:13:46 来源:范文大全 收藏本文 下载本文 手机版

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除APTT外,其它3种试剂的主要成分都是蛋白质或酶。

PT的主要成分是组织因子(或凝血因子III),它是由263个氨基酸残基组成的跨膜蛋白;而FIB和TT试剂的主要成分都是凝血酶。蛋白质和酶都是生物大分子,它们的活性依赖于其自身正确的精细空间结构的维系。在液体状态下,其结构非常脆弱,酸,碱、温度的变化以及某些化合物的少量存在都会引起这种空间结构的变化甚至瓦解;即使局部结构的微小变化也会引起生物活性的丧失。所以,冻干一直是保持生物大分子活性的最佳选择。然而即使是冻干品,如果发生“吸潮”现象,也会使活性很快丧失。克服蛋白质变性是研发液体血凝试剂的关键。

微生物生长时威胁液体血凝试剂稳定性的另一个因素。含酶的液体试剂不能用高压蒸汽灭菌,否则酶很快发生不可逆变性。常用的办法是将试剂通过0.22um的滤膜,使微生物留在滤膜上。但开盖和取液后又会被微生物污染,这就是为什么试剂一旦开盖后保存期就变短的原因。另外,在液体试剂中添加防腐剂也是阻止微生物生长的常用方法,但必须保证所选择的防腐剂对试剂的有效成分无害,而且不影响血凝试剂试验。

反复冻融不会影响FIB和TT试剂,但会破坏PT和APTT。原因是,PT和APTT都含有起关键作用的脂质体,这是一种由类脂膜形成的微小球体,亲水层在膜外,殊水层在膜内。构成PT主要成分的组织因子必须将它的一端以正确的取向嵌入脂质体中,否则就没有活性或活性很低。而APTT也是由类似结构和鞣花酸组成的,二价金属离子可能起桥梁作用,将二者联系在一起。

反复冻融会使脂质体破裂,导致PT和APTT失去活性,这就是为什么PT和APTT使用说明书往往标明“严禁冻融”的原因。如无特殊设备,液体血凝试剂在冬季运输过程中常常发生冻结。如何解决液体血凝试剂的抗冻问题是摆在研发者面前的另一个挑战。在我国,研制抗冻PT和抗冻APTT有一定的现实意义。

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