还有个奇怪的现象，2天的时候克隆直径不到2MM，还是乳白色的，长到第3天后居然变成粉红色的了，有的板红色的程度更深一些
查资料，考虑有2个原因：1，长的时间太长，菌种老化了
2，培养板上的Ade含量不足，产生了代谢产物是粉红色的(这一现象别人在实验中也出现了)
3.也有人解释说是后期ade不足
般酵母双杂交的bait序列不超过2000bp比较合适，这是因为
1、酵母的密码子和人的密码子有偏好性的差异，当基因超过2000bp后，密码子偏好性的累积效应造成蛋白翻译困难；
2、过大的bait蛋白的空间位阻效应会影响Gal4的AD和BD的互做，就会造成即使bait和prey有互做时，Gal4的BD和AD没有互做，从而不能激活报告基因表达。你的基因2346bp，对酵母来说，翻译比较困难，所以，酵母生长缓慢，你可以考虑将你的基因分成两段，分别用于筛库。
《做酵母四个月的心得.doc》
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