二轮实验复习
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一、实验试剂
1.用到酒精的实验
（1）叶绿素的提取：无水酒精用于提取光合色素
（2）物质鉴定实验：50%酒精用于洗去浮色（苏丹III和IV） （3）DNA粗提取：95%冷酒精用于析出DNA
（4）观察有丝分裂：95%酒精与15%盐酸1:1混合（解离液）用于使组织细胞分散开 （5）微生物培养、植物组培、动物细胞培养等中的无菌操作：75%酒精用于消毒 （6）土壤中小动物类群丰富度的研究：70%酒精用于保存土壤中的小动物 （7）萨克斯的叶片遮光实验：用95%酒精煮叶片达到脱色 2.用到盐酸的实验
（1）观察有丝分裂：95%酒精与15%盐酸1:1混合（解离液）用于使组织细胞分散开 （2）观察细胞中DNA与RNA的分布：8%盐酸用于①增大细胞膜对甲基绿、吡罗红的通透性；②让DNA更好地与甲基绿结合
（3）探究影响酶活性的调节：5%盐酸用于调节反应体系的pH （4）植物组织培养技术：盐酸用于调节培养基的pH （5）微生物的纯化与培养：盐酸用于调节培养基的pH
（6）生物维持pH稳定的机制：0.1mol/L盐酸用于改变溶液体系的pH
（7）促胰液素的发现：斯他林和贝利斯用盐酸刺激使小肠粘膜产生促胰液素 3.用到NaOH的实验
（1）探究影响酶活性的调节：5%的NaOH用于调节反应体系的pH （2）植物组织培养技术：NaOH用于调节培养基的pH （3）微生物的纯化与培养：NaOH用于调节培养基的pH
（4）生物维持pH稳定的机制：0.1mol/L的NaOH用于改变溶液体系的pH （5）物质鉴定实验：0.1g/mL的NaOH用于配置斐林试剂和双缩脲试剂 （6）探究酵母菌的呼吸方式：10%的NaOH用于吸收CO2
（7）细胞大小与物质运输的关系：将含有酚酞的琼脂块浸入NaOH溶液中 4.用到蒸馏水（清水）、无菌水的实验
（1）使用高倍显微镜观察细胞：蒸馏水用于制作植物细胞的临时装片，也用于洗去某些多余的染液
（2）制备细胞膜：蒸馏水用于涨破红细胞
（3）DNA的粗提取：①蒸馏水用于涨破动物细胞以获取含DNA的混合溶液；②蒸馏水用于稀释2mol/L的NaCl溶液。
（3）观察植物细胞质壁分离及复原：清水用于制作临时装片和使细胞发生质壁分离复原
（4）微生物的纯化与培养：无菌水用于稀释菌液
（5）蒸馏水、清水经常作为植物为材料的探究实验中的空白对照
（6）观察细胞的有丝分裂、减数分裂：漂洗细胞，防止过度解离以及影响染色 5.用到特定酶的实验
（1）植物体细胞杂交：果胶酶和纤维素酶用于水解细胞壁
（2）动物细胞培养技术：胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）用于分散动物细胞
（3）基因工程：限制酶用于剪切DNA，DNA连接酶用于目的基因与载体的连接 （4）PCR技术：耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）用于催化DNA的延伸
1 （5）比较过氧化氢的分解：肝脏研磨液中的过氧化氢酶用于催化过氧化氢的分解
（6）探究影响酶活性的条件：淀粉酶、过氧化氢酶分别用于探究温度、pH对酶活性的影响
（7）DNA的粗提取：嫩肉粉中的木瓜蛋白酶可以水解蛋白质
（8）艾弗里的肺炎双球菌转化实验：DNA酶用于水解DNA，验证DNA是转化因子
二、实验器材
1.用到显微镜的实验
（1）使用高倍显微镜观察细胞
（2）物质鉴定实验：检测脂肪时用于观察细胞中被染色的脂肪粒 （3）观察DNA与RNA在细胞中的分布
（4）制备细胞膜：用于观察涨破前后的血红细胞 （5）观察线粒体和叶绿体、观察细胞质环流 （6）观察植物细胞质壁分离及复原
（7）生物膜结构的探索：罗伯特森用电子显微镜观察细胞膜，光学显微镜观察人鼠融合细胞
（8）观察细胞的有丝分裂、减数分裂 （9）低温诱导植物染色体数目的变化 （10）培养液中酵母菌种群数量的变化 2．用离心机的实验
（1）分离细胞器：差速离心用于分离不同重量的细胞器 （2）制备细胞膜：将涨破的细胞膜离心至沉淀中
（3）赫尔希、蔡斯的噬菌体侵染实验：将细菌离心至沉淀中，观察放射性的分布 （4）探究DNA的复制方式：密度梯度离心用于观察子代DNA的重量差异 （5）PCR技术：离心用于反应体系的混合
（6）植物体细胞杂交、动物细胞融合：离心可以诱导原生质体或动物细胞融合
三、实验材料
1.对实验材料有特殊要求的实验
（1）物质鉴定实验：实验材料本身无色或颜色浅 （2）制备细胞膜：哺乳动物红细胞
（3）DNA的粗提取：DNA含量较高且较易提取（不能是哺乳动物的血细胞） （4）观察细胞的有丝分裂、低温诱导染色体加倍：植物根尖分生区细胞
（5）观察细胞的减数分裂：植物的花药、动物的雄性生殖器官（精巢或睾丸） （6）观察植物细胞质壁分离及复原：成熟的、液泡中有颜色的植物细胞
（7）调查人群中的遗传病：调查发病率需要对人群进行随机抽样，调查遗传方式需要找患者家系
（8）植物组织培养：分化程度低，全能性高的植物外植体
（9）动物细胞培养：胚胎或幼龄动物的组织、器官（分裂能力强）
2.需要保持实验材料活性的实验（活体实验）
3.实验操作导致实验材料死亡的实验
四、实验条件
需要控制温度条件的实验
（1）物质鉴定实验：鉴定还原糖和DNA需要水浴加热
2 （2）探究影响酶活性的条件：温度对酶活性的影响（水浴）
（3）传统发酵技术：果酒要求18~25℃，果醋要求30~35℃，腐乳要求15~18℃，泡菜要求室温
（4）探究环境对光合作用的影响：温度条件相同且适宜 （5）低温诱导染色体加倍：4℃诱导36h
（6）微生物的纯化与培养：高压蒸汽灭菌一般121℃维持15~30min，保存菌种一般在4℃以下，倒平板需要让固体培养基凝固（50℃以下），巴氏消毒法（60～82℃长时间） （7）PCR技术：90℃左右变性，55℃左右退火（复性），70℃左右延伸
（8）动物细胞培养：培养细胞所对应的动物体体温，哺乳动物一般是36.5±0.5℃ （9）植物组织培养：一般是18~22℃
（10）萨克斯叶片遮光实验：在用95%酒精中煮浴叶片脱色
五、实验操作
需要进行筛选的实验
（1）微生物的分离与纯化：筛选土壤中的尿素分解菌和纤维素分解菌 （2）低温诱导染色体加倍：筛选染色体加倍的细胞
（3）植物体细胞杂交和动物细胞融合：筛选融合的杂种细胞
（4）单克隆抗体的制备：两次筛选①筛选出杂交瘤细胞②筛选出特定的（能产生单一抗体的单克隆的）杂交瘤细胞
（5）基因工程技术：筛选出转化了表达载体的受体细胞，筛选出能产生目的蛋白质的转基因生物
（6）单倍体育种：筛选出所需性状的纯合体
六、实验方法
1.利用同位素标记法的实验
（1）探究分泌蛋白的合成与运输路径：用3H-亮氨酸标记氨基酸
（2）探究光合作用的科学发现史：鲁宾和卡门用18O分别标记H2O和CO2，卡尔文用14C标记CO2
（3）赫尔希和蔡斯的噬菌体侵染实验：用32P标记DNA，用35S标记蛋白质 （4）探究DNA的复制方式：用15N、14N分别培养大肠杆菌（无放射性）
（5）核酸分子杂交技术：标记基因探针，检测目的基因是否导入受体细胞和目的基因是否转录
（6）蛋白质分子杂交技术：标记抗体，检测目的基因是否导入表达，杂交瘤细胞的筛选、单抗诊盒和生物导弹
2.利用分子杂交技术的实验
七、实验思想
用假说-演绎法思想进行的实验
（1）孟德尔的豌豆杂交实验 （2）摩尔根的果蝇杂交实验
（3）DNA是遗传物质（艾弗里、赫尔希）
（4）DNA的复制方式
（5）遗传密码的破译（选学）
（6）促胰液素的发现
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