一、1
1、由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫DNA重组技术，即指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和人物产品。
2、限制酶（限制性核酸内切酶），主要是从原核生物中分离纯化出来的，能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部分的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
3、两类DNA连接酶：大肠杆菌→E.coliDNA 连接酶→互补黏性末端
T4唑菌体→T4DNA连接酶→两者皆可，平末端效率较低。
４、质粒作为载体将基因送入细胞中，质粒是一种裸露的、结构简单，独立于细菌非核DNA之外并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。质粒DNA分子上有一个至多个限制酶切割位点供外浮DNA片段（基因）插入其中。质粒进入受体细胞后自我复制或整合到染色体DNA随其同步复制。 ５．基因工程中使用的载体除质粒外，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
—、2
1、基因工程主要有四个步骤：
目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定
2、PCR是多聚酶链式反应的缩写，PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，PCR是利用DNA双链复制的原理，将基因的核苷酸序列不断地加以复制促其数量指数方式增加。
3、基因表达载体: 目的基因
启动子：位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位
终止子：位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的DNA段片段
标记基因：是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因。 使目的基因在受体细胞中稳定存在（转化），并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用（转化）。
4、
(1)导入目的基因（植物）：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法（中国独创）
(2)导入目的基因（动物or受精卵）操作顺序：表达载体提纯.（DNA浓度1～3μg/mL）----→取卵受精----→显微注射仪显微注射（目的基因）----→胚胎早期培养----→移植 (2)导入目的基因（微生物）
原核生物优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少
大肠杆菌转化方法：Ca2+ 处理细胞----→使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(感受真 细胞) ----→重组表述载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合----→一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子。
5、
（1）检验目的基因插入
DNA分子杂交技术：提取转基因生物基因组DNA----→在含有目的基因的DNA----→片段上用放射性同位素标记----→以此为探针与基因组DNA杂交----→显系杂交带证明目的基因 （2）检验MRNA转录：用标记的目的基因作探针和MRNA杂交 （3）检验蛋白质翻译：抗原—抗体杂交
（4）个体生物学水平鉴定:抗虫抗病接种试验
一、4
1、蛋白质工程基本途径:预期蛋白质功能----→没没蛋白质结构----→推测氨基酸序列----→找到对应脱氧核苷酸序列。
二、1
1、细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人的意愿来改变细胞内遗传物质或获得细胞产品的技术。
2、植物组织培养：诱导产生愈治组织丛芽最缝行或完整植株。
植物体细胞杂交：纤维素酶和果胶酶去除细胞壁获得原生质体----→诱导原生质体间融合 ----→培育该杂种细胞
二、2
1、动物细胞培养：取出组织块，剪碎----→胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理----→培养液稀释制成细胞悬液----→合适环境培养
细胞贴壁：悬液中分散细胞很快就贴附在瓶壁上。对培养液所有培养用具无菌处理，添加一定量的抗生素以防止污染，定期更换培养液以防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。在使用合成培养基时加入血清等一些天然成分。细胞培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需，CO2主要作用是维持培养液的PH（95%空气+5% CO2）.
2、培养器皿要求：光滑无毒、易于贴附
3、细胞的接触抑制：，贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖。
4、人们将动物组织消化持的初次培养称为原代培养。
细胞接触抑制后重新处理再培养增殖的为传代培养。
二、3 动物核移植 胚胎细胞核移植
体细胞核移植
1、体细胞核移植：从供体取体细胞→显微操作去除卵母细胞中的核（MⅡ期）----→将供体细胞注入去核卵细胞----→电刺激使两细胞融合，供细胞进入受体卵母细胞构建重组胚胎----→移植(电脉冲、Ca2+载体、乙醇、蛋白酶合成制剂激活受体细胞使其完成细胞分裂和发育进程。
2、动物细胞融合：克服远缘杂交。 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导方法也类似聚乙乙醇（PEG）、无活病毒、电激）
3、单克隆抗体：优点：特性强、灵敏度高、并能大量制备
制备过程：注射特色蛋白----→B淋巴细胞和骨髓瘤细胞----→杂交细胞----→选择培养基上筛选
--------→克隆该杂交细胞----→分开杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞----→小鼠腔培养或体外培养。
1、杂交细胞特点：既能迅速大量繁殖，又能产生 一的抗体。
三、1
1、当在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时，说明卵子已经完成了受精，这是判断卵子是否受精的重要标志。
2、精子触及卵细胞膜的瞬间会产生阻止后来精子进入透明带的生理反应，即为透明带反应（先）。 精子入卵后，卵细胞膜会立即发生一种生理反应，拒绝其它精子再进入卵内，即为卵细胞膜反应（后）。
3、卵裂期胚胎细胞特点：细胞分裂方式为有丝分裂，细胞的数量不断增加，胚胎总体积不增加或略缩小。
4、桑椹胚→囊胚（囊胚腔）→原肠层（内外胚层）
三、2
1、促进腺激素处理排卵/（超声波探测议、内窥镜或腹腔镜）直接取卵。
2、哺乳动物胚胎的培养液成分，除一些无机盐和的有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分各以及血清等物质。
三、3
1、胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体和繁殖潜力。
2、生理学基础：
第一。哺乳动物发情排卵后，不管是否妊娠，在一段时间内，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的，这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。
第二、哺乳动物的早期胚胎形成后，在一定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系，而是处于游离状态，这就为胚胎有收集提供了可能。
第三，大量的研究已经证明，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。
第四，供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但移入受体的供体胚胎的遗传特性，在孕育过程中不受任何影响。
3、供受体选择----→同期发情处理----→超数排卵处理----→进行配种或人工授精用（冲卵）装量把胚胎洗出来----→质量检查胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段（可-196℃液氮保存）----→胚胎移植。
4、哺乳动物的胚胎干细胞简称Es或Ek细胞，，是由早期胚胎或原始性腺分离出来的一类细胞，Es细胞具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显，功能上表现为具有发育的全能性，在体外培养的条件下，Es细胞可增殖而不发生分化。可冷冻保存也可进行遗传改造。
5、Es细胞在饲养层细胞上（即输卵管上皮细胞,可提供营养)
五、1
1、生态系统稳定性四原理：特种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理(一荣俱荣、一损俱损）、系统学与工程学原理
2、系统整体性原理：系统各组分之间要有适当的比例关系，只有这样才能顺利完成能量物质信息的转换和流通，实现总体功能大于各部分之和的效果。
