ABO-Rh正反定型血型定型操作规程
一、项目名称、检验方法名称
1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型 2．检验方法名称：柱凝集
二、方法学原理
该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物
1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc) 2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse 3．包装规格：
400卡/箱 试剂卡（707100）；100卡/箱 试剂卡（707155） 4．试剂成分：
BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.
成分描述 第一柱：抗－A试剂 抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料 第二柱：抗－B试剂 抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料 第三柱：抗－D试剂（抗RH） 抗－D人单克隆(lgM)抗体 第四柱：质控 优化增强剂，用于血型检测的质控对照 第五，第六柱：反定型稀释液 优化增强剂，用于反定型血型检测 5．试剂的储存与效期：
储存条件： 2～25℃环境中保存。请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效 期： 试剂盒上有记载
四、仪器品牌、型号
BioVue专用离心机 ；BioVue专用孵育器
五、样本的采集与准备：
在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。已凝集的标本以及用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的标本应在7天内检测。献血员标本应在其效期内检测。
采集自脐带血的红细胞应确保没有污染。如怀疑样品污染需用生理盐水洗涤。 抗凝全血标本以900－1000g离心5分钟，即可得到浓度约为80％的浓缩红细胞。 1ml生理盐水＋40ul浓缩红细胞 即配制成3％的红细胞悬液。
或 1ml生理盐水＋10ul浓缩红细胞 即配制成0.8％的红细胞悬液。
六、试剂准备：
BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。请勿使用液面在玻璃珠以下的试剂卡。 需准备3％或0.8%浓度的用于反定型的红细胞试剂。
七、具体操作步骤
按照“样本的采集与准备”部分配置红细胞悬液。
取出试剂卡，确保平衡至室温；使用前离心，确保无气泡、无断层。 在有条形码的一面作标本标记。
使用打孔器，将试剂卡倒置下压，插入打孔器中，然后取下密封条。
反定型：在相应试剂卡的反应腔（第5和6号微柱）中加入40ul血清/血浆，然后加入10ul的3％反定型的红细胞试剂（或50ul的0.8％红细胞试剂）。
质控微柱：在4号柱加入40ul血清/血浆，然后加入10ul的3％标准O细胞悬液（或50ul的0.8％标准O细胞悬液）。
正定型：在相应试剂卡的反应腔中（第1，2，3号微柱）加入10ul的3％红细胞悬液（或50ul的0.8％红细胞悬液）。 使用BioVue离心机离心。（离心必须在加样完成后30分钟内进行） 从微柱的正反两面判读凝集和/或溶血结果。
在有较强阳性反应的试剂卡一侧读取并记录反应强度。 BioVue结果判读：
阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果，表明红细胞表面存在相应的抗原。反定型测试中，无论是否发生凝集，溶血的存在视为阳性结果 阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集是阴性结果，表明红细胞表面不存在相应抗原
溶血会导致玻璃珠上方呈浅粉色或红色。部分溶血时，有可能不出现凝集 4＋反应：红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带 3＋反应：发生凝集的大部分红细胞停留在柱的上半部分
2＋反应：发生凝集的红细胞分布于整个柱体，柱的底部可见少量的细胞 1＋反应：大部分凝集的红细胞停留在柱的下半部分，柱的底部有少量红细胞 0.5＋反应：大部分凝集的红细胞穿过玻璃珠，在柱的底部形成一个粗糙的（不平整的）红细胞聚集带，聚集带上方可见少量红细胞
0阴性：所有红细胞均穿过玻璃珠，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带
八、操作注意事项
1.所有血液标本以及与血液有接触的材料都视同传染性物质，依照实验室管理操作规范处置。
2.不适宜的存储条件可能会影响产品质量。注意：每个试剂盒卡的架子外面都贴有一个圆形的温控指示点，如指示点圆圈内为蓝色，说明试剂卡曾被暴露在可能影响产品质量的温度环境中。使用这些试剂卡时可能出现假阴性的检测结果。请勿使用这样的试剂卡。 3.请勿使用超过效期的试剂卡。
4.卡中液体试剂的冷冻或蒸发都有可能影响未凝集红细胞通过玻璃珠而到达微柱的底部。 5.请勿使用表面破损的试剂卡或微柱内试剂液面低于玻璃珠介质或褪色的试剂卡。 6.不恰当的使用启封装置或将插有启封装置的试剂卡坠落会在加样时引起交叉污染。 7.不恰当的技术操作会导致错误结果，具体可能的原因如下：
未使用本规程中推荐的红细胞浓度。 实验过程中的辅助材料发生微生物污染。
使用了含有某种特殊成份的标本（阻碍了红细胞自由穿过微柱中的介质）。 采用了严重溶血的标本（可能影响结果判读）。
