第 八 章 血液常规检查检验程序
检测血液中红细胞、白细胞和血小板数量、白细胞分类及相关参数(HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW及MPV等)的变化对临床有关疾病的诊断、观察疾病的变化及治疗效果具有重要参考价值。现根据ISO15189文件―《医学实验室质量与能力专用要求》的规定，以SF-3000、ADVIA-120和BC-2000血细胞分析仪为例进行介绍。
第一节 血细胞分析仪检测原理
血常规检查方法采用血细胞自动分析仪法，参见《全国临床检验操作规程》p7～11，白细胞分类计数采用显微镜检查法，参见《全国临床检验操作规程》p5～7。现简要介绍如下。
一、电阻抗法血细胞计数
在细胞检测器微孔的两侧各有一个电极，两电极间通有恒定电流，经过稀释液(电解质溶液)稀释的血样(血细胞)在通过检测器微孔时，产生了一个电脉冲；脉冲的高低代表细胞体积的大小，脉冲的个数代表细胞的数目。记录脉冲的数目可以得到细胞计数的结果。
二、细胞化学和光散射法白细胞计数
将血液经过细胞化学试剂染色，不同的白细胞胞浆内部即可出现不同的酶化学反应。当这些白细胞通过测量区时，由于酶反应强度不同和细胞体积大小差异，激光束射到细胞上的前向角和散射角不同，以X轴为吸光率，Y轴为光散射，每个细胞产生两个信号结合定位在细胞分布散点图上。计算机对存储的测量信息进行分析处理，得出白细胞总数和分类计数结果。适用于ADVIA-120血细胞分析仪。
三、多角度激光法白细胞计数
在白细胞分类通道：全血加入溶血剂(FD-Ⅰ和FD-Ⅱ)作用后，嗜酸性粒细胞内颗粒被染色；其他白细胞略有皱缩。WBC/BASO通道：全血加入溶血剂(FB)溶血。除BASO外，其他白细胞均明显皱缩。仪器从低角度及高角度分析白细胞的内部结构。计算机对存储的测量信息进行分析处理，得出白细胞总数和分类计数结果。适用于SF-3000血细胞分析仪。
四、光电比色法测量血红蛋白
在稀释的血样中加入溶血剂使红细胞膜破裂释放出血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结合形成Hb衍生物，进入Hb测试系统，在特定波长(一般在530～550nm)下比色，吸光度的变化与液体中Hb含量成正比，仪器便可显示其浓度。不同型号的血细胞分析仪配套溶血剂配方不同，形成的Hb衍生物亦不同，其吸收光谱各异但最大吸收均接近540nm。
五、光散射法红细胞和血小板计数
以二维激光散射法检测红细胞和血小板。红细胞测试原理是：在测试系统中，全血与红细胞/血小板稀释液混合，使自然状态下双凹盘状扁平圆形的红细胞成为球形并经戊二醛固定，此种处理并不影响MCV体积。红细胞无论以何种方位通过测量区时，被激光束照射后所得的信号是相同的。激光束以低角度前向光散射和高角度光散射同时测量一个红细胞，根据低角度光散射转换能量大小，测量单个红细胞体积与总数；根据高角度光散射得出单个红细胞内血红蛋白浓度。血小板与红细胞在一个系统中测量，其原理是：根据同质性球体光散射的Mie理论，当球形化的血小板单个通过激光照射区时，仪器在两个角度测定激光的散射强度：高角度主要测细胞的折射指数(RI)，它与细胞的密度有关；低角度主要测细胞体积的大小。血小板的体积在1～30fl，RI在1.35～1.40。计算机对存储的测量信息进行分析处理，得出红细胞和血小板计数结果。适用于ADVIA-120血细胞分析仪。
六、显微镜白细胞分类计数
把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，经瑞氏染料染色后，在显微镜下根据白细胞形态特征予以分类计数，得出相对比值(百分率)，并观察细胞形态的变化。
第二节 仪器性能参数
血细胞分析仪的操作性能因仪器的种类与型号不同而异。
一、SF-3000血细胞分析仪
1.该仪器检测血细胞的测量范围为 WBC：(0.0～99.99)×109/L；RBC：(0.00～9.99)×1012/L、HGB：1～300g/L；PLT：(0～999)×109/L。
2.本仪器检测血细胞的精密度为 WBC：±3.0%；RBC：±1.5%；HGB：±1.5%；PLT：±5.0%。
二、ADVIA-120血细胞分析仪
1.本仪器检测血细胞的测量范围为 WBC：(0.00～400)×109/L；RBC： (0.00～6.76)×1012/L；HGB：0～225g/L；PLT：(0～3980)×109/L。
2.本仪器检测血细胞的精密度为 WBC：±3.0%；RBC：±1.5%；HGB：±1.5%；PLT：±5.0%。
三、BC-2000血细胞分析仪
1.本仪器检测血细胞的测量范围为 WBC：(0.0～99.99)×109/L；RBC：(0.00～9.99)×1012/L；HGB：0～300g/L；PLT：(0～999)×109/L。
2.本仪器检测血细胞的精密度为 WBC：±3.0%；RBC：±2.0%；HGB：±2.0%；PLT：±5%。
第三节 血常规检验程序主要内容
一、标本
1.临床护士抽取患者抗凝静脉血2ml。 2.采血后立即送到临床检验科。
3.血量不够1ml或血液凝固、溶血或严重脂血标本不能进行检测。
二、设备和试剂
1.设备 SF-3000、ADVIA-120、MEK-6108K和BC-2000血细胞分析仪。 2.试剂
（1）稀释液、溶血剂和清洗液。
（2）CBC试剂、DIFF试剂、消泡剂和鞘液冲洗液。 （3）瑞氏染液及缓冲液。
3.购买的试剂应放室温保存，注意防尘、防潮。
4.开封后的试剂应尽快用完，变质、超过有效期的试剂不能使用。
三、容器及试剂添加剂
血液标本采集的容器是一次性含EDTA-K2抗凝剂的真空采血管；血液标本必需添加剂是EDTA-K2抗凝剂。
四、校准步骤
血细胞分析仪的操作过程分别见SF-3000血细胞分析仪标准操作程序(PLA 301-LJK-ZY-YQ-07)、ADVIA-120血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-08)和BC-2000血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-09)中6 仪器校准程序。
五、操作步骤
1.申请单及标本编号 整理血液常规检验申请单及血液标本，审核合格后，对检验申请单和血液标本进行编号。
2.上机测试
操作过程分别见SF-3000血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-07)、ADVIA-120血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-08)、BC-2000血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-09)和MEK6108-K血细胞分析仪标准操作程序标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-06)。
3.检验结果的输入
（1）打开电脑，启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。
（2）单击“检验”菜单，选择“检验结果录入\\修改”，进行检验结果的录入及修改。通过申请序号进行结果的输入，选择“工作单号”(SF-3000自动传输：S+星期几+当前检验标识序号；ADVIA-120自动传输：B+星期几+当前检验标识；BC-2000测定结果和其他非自动传输标本：NK+星期几+当前检验标识序号序号)，仪器会自动传输入检测结果；同时输入当前患者的样品“采集时间”和“接收时间”。
（3）仪器检测结果进一步做镜检的标准
① BC-2000血细胞分析仪等三分类仪器检测的标本全部需要镜检血涂片。
② SF-3000和ADVIA-120血细胞分析仪等五分类仪器检测结果根据本程序第三节十五[白细胞五分类血细胞分析仪的白细胞分类筛选原则]筛选出需要做血涂片检查的血标本。
③临床医师要求做红细胞、白细胞、血小板等形态检查的血标本。 ④血液病患者的检测标本全部镜检血涂片。 4.显微镜检查操作步骤
（1）制片：静脉抗凝血标本混匀或末梢血标本，采血后推成厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。推好的血膜在空气中晃动，以促使快干，以免细胞变形缩小。
（2）染色：平置玻片于染色架上，滴加瑞氏染色液5～8滴，使其迅速盖满血膜，约1min后，滴加缓冲液8～10滴，轻轻摇动玻片或用吸耳球对准血片吹气，与染液充分混合，15～20min后用水冲去染液，待干。
（3）镜检：先用低倍镜或高倍镜阅览全片，注意观察血片染色情况：如有无血小板或红细胞聚集，片尾有无巨大异常细胞，再结合仪器警告的内容，分别重点从白细胞分类、红细胞参数和血小板参数等方面进行观察，记录各类细胞结果。
5.镜检结果的输入及报告确认 单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”、“报告日期”、“单张”或“批量”后，按“提取”键提取检测结果，对检验结果进行逐一确认。
6.检测过标本及废物的处理 检测过的血液标本、废液及经血液标本污染的各种废物按血液常规标本的采集与处理程序(详见第七章第四节)进行处理。
六、质量控制
1.室内质控 周一～周五每天做室内质控(厂家提供的质控物)。测定过程是：从4～8℃冰箱取出全血质控物置室温，血细胞分析仪开机后预热20min，分别将质控物混匀后上机检测，打印结果并与允许值范围对比，质控合格后才能检测病人血标本。对于失控应按质量控制程序处理，仪器质量控制当天的情况进行逐一登记。
2.室间质控 每月参加科内的室间质控考评2次。每年参加卫生部和WHO室间质控。
七、干扰因素
1.严重的黄疸或脂血使血红蛋白结果假性增高。
2.红细胞冷凝集可使红细胞和血小板计数结果假性减低，白细胞假性增高(电阻抗法)或假性减低(激光法)和MCV假性增高。
3.冷凝球蛋白增高使白细胞和血小板计数结果假性增高。 4.有血小板凝集者可使血小板计数结果假性减低。
八、结果计算及测量不确定度 按仪器设计原理，只对红细胞常数(红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白量、红细胞平均血红蛋白浓度)进行计算，可根据RBC、HGB及HCT结果求出。
1.红细胞平均体积(MCV)：根据RBC及HCT，由下式求出。
每升血液中红细胞比积Hct 每升血液中红细胞个数 RBCMCV(fl)2.红细胞平均血红蛋白量(MCH)：根据RBC及HGB，由下式来求出。
MCH(pg) 每升血液中血红蛋白含量Hb 每升血液中红细胞个数 RBC3.红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)：根据HCT及HGB，由下式来求出。
MCHC(g/L) 每升血液中血红蛋白含量Hb
每升血液中红细胞比积 Hct4.RDW 由血细胞分析仪测量获得，是反映周围血红细胞体积异质性的参数。当红细胞通过小孔的一瞬间，计数电路得到一个相应大小的脉冲，不同大小的脉冲信号分别贮存在仪器内装计算机的不同通道，计算出相应的体积及细胞数，统计处理而得RDW。
5.测量不确定度
（1）SF-3000血细胞分析仪检测血细胞测量不确定度为：WBC：±0.22×109/L(=3.87)、±0.46×109/L(=6.07)和±0.80×109/L(=13.27)；RBC：±0.22×1012/L(=2.39)、±0.24×1012/L(=4.18)和±0.36×1012/L(=6.02)；HGB：±2.60g/L(=82.60)、±3.66g/L(=129.53)和±5.48g/L(=168.07)；PLT：±15.66×109/L(=64.60)、±25.80×109/L(=200.40)和±40.82×109/L(=340.93)。
（2）ADVIA 120血细胞分析仪仪器检测血细胞测量不确定度为：WBC：±0.26×109/L(=3.69)、±0.32×109/L(=5.36)和±0.74×109/L(=13.32)；RBC：±0.20×1012/L(=2.41)、±0.22×1012/L(=4.13)和±0.30×1012/L(=5.19)；HGB：±2.90g/L(=82.90)、±3.66g/L(=130.63)和±4.38g/L(=1625.10)；PLT：±10.32×109/L(=50.17)、±24.02×109/L(=201.13)和±30.54×109/L(=329.10)。
（3）BC-2000血细胞分析仪仪器检测血细胞测量不确定度为：WBC：±0.22×109/L(=3.87)、±0.46×109/L(=6.07)和±0.80×109/L(=13.27)；RBC：±0.22×1012/L (=2.39)、±0.24×1012/L(=4.18)和±0.36×1012/L(=6.02)；HGB：±2.60g/L(=82.60)、±3.66g/L(=129.53)和±5.48g/L(=168.07)；PLT：±15.66×109/L(=64.60)、±25.80×109/L(=200.40)和±40.82×109/L(=340.93)。
测量不确定度的来源包括标本、标本采集过程、送检时间、保存条件、药物、测试系统、员工操作步骤等因素。
九、生物参考区间与实验室解释
参见第七章第三节的有关内容。
十、血细胞检验结果可报告区间
1.阻抗法仪器 WBC：(0.2～99.99)×109/L；RBC：(0.50～9.99)×1012/L；HGB：0～299g/L；PLT：(10～999)×109/L。
2.激光法仪器 WBC：(0.02～400)×109/L；RBC：(0.05～7.00)×1012/L；HGB：0～225g/L；PLT：(5～3500)×109/L。
十一、血细胞警告或危急值
白细胞＜0.5×109/L；红细胞＜1.0×1012/L；血红蛋白＜30g/L；血小板＜20×109/L。
十二、安全性预警措施
1.血液标本的运输必须保证运送过程中的生物安全，防止溢出。血液标本溢出后，应该立即对污染的环境和设备进行消毒处理。对标明有传染性疾病的血液标本应特别防护，以不污染环境或保护工作人员安全为前提。
2.在进行血液分析的一切操作活动中，应按《实验室安全管理》程序执行。在进行操作前，首先应采取必要的保护性措施如穿戴保护性外套、手套等。
3.与血液标本接触的一切器皿、仪器组装/拆卸组合零件都应视为污染源，因此操作人员不小心接触了这种污染源时，应立即用清水冲洗被污染区域并进行消毒处理。
4.如果操作人员的皮肤或衣物上沾到了血液及废液，应立刻用清水冲洗并进行消毒处理。
5.如果眼睛被溅入血液及废液，用大量的清水冲洗并采取必要的医疗措施。 6.如血液标本采用开盖程序测试，开盖时应防止气雾胶污染环境。 7.所有检查过的血液样本及有关的废弃物，都会给您带来潜在的危险或生物污染。所有废弃样本及废弃物的处理方法同血液标本的处理程序。
十三、变异潜在来源
1.严重的黄疸或脂血标本可使血红蛋白结果假性增高。
2.标本溶血可使红细胞结果假性减低、血小板计数结果假性增高。
3.红细胞冷凝集可使红细胞和血小板计数结果假性减低，白细胞假性增高(电阻抗法)或假性减低(激光法)和MCV假性增高。
4.冷凝球蛋白或冷纤维蛋白增高使白细胞和血小板计数结果假性增高。 5.有血小板凝集者可使血小板计数结果假性减低。 6.试剂的温度。
7.检测器微孔不完全堵塞。
8.标本采集后放置的环境温度过高、时间过长。 9.试剂变质或过了有效期而未发现等。
十四、白细胞五分类血细胞分析仪的白细胞分类筛选原则
1.血液病患者的血标本，无论血细胞计数结果和细胞分布图是否正常，一律做血涂片镜检。
2.无论初诊或复诊患者的血标本，只要白细胞、红细胞/血红蛋白和血小板计数结果正常，白细胞散射图、红细胞和血小板直方图均正常且无报警者，可不做血涂片镜检。
3.初诊患者，其白细胞、红细胞/血红蛋白、血小板计数结果，白细胞散射图、红细胞和血小板直方图中有一项异常或报警时，均需做血涂片镜检。
4.复诊患者，其血细胞计数结果与前一次结果无明显变化，但白细胞散射图异常且有报警时，需做血涂片镜检。
5.复诊患者，其血细胞计数结果与前一次检测结果相比有变化，但与临床诊断或治疗相符；而且白细胞散射图正常无报警时，可不做血涂片镜检。
十五、异常结果处理
血细胞分析仪测试的血常规结果异常需与临床诊断相符，不符合的结果应复查。
十六、报告时间与标本保存
1.病房患者的血常规检验结果报告单应于当日下午4:00前由卫生员发回病房科室。 2.检验后的血常规标本应放置室温保存至次日上午8:00丢弃。
十七、实验方法的溯源
见SF-3000、MEK-6108K、BC-2000和ADVIA-120血细胞分析仪使用说明书。
