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TPS法提取植物DNA

发布时间:2020-03-02 10:19:19 来源:范文大全 收藏本文 下载本文 手机版

TPS法提取植物DNA

1、取少量叶片置2ml管子中,加入钢珠;

2、加入400-500ul TPS;

3、粉碎机粉碎,75℃水浴30mins;

4、12000rpm离心10mins;

5、取上清(200ul)至96孔板中,4800rpm离心5mins;

6、取上清(约100ul)至新96孔板中,加等体积异丙醇(用排枪)(先将异丙醇加入96孔板,再加上清,吹打);

7、用保鲜膜包好,放置-20℃ 0.5h以上;

8、12000rpm离心5mins,去上清;

9、加入200ul 75%酒精,静置10mins,离心2mins,去酒精,干燥;

10、加50ul ddH2O,混合均匀,离心。

TPS配方

100ml 1M (PH8.0) Tris-HCl

10ml 0.5M EDTA (PH8.0)

2ml KCl

7.45g ddH2O

至100ml

真菌DNA抽提方法-----CTAB法

1、从PDA培养基上取菌丝至1.5ml管中,液氮研磨;

2、加入CTAB buffer 300ul, 70℃烘箱放置1h;

3、加入等体积的氯仿充分vortex涡旋震荡混匀;

4、12000rpm,10mins;

5、取上清液(约200ul),加入等体积异丙醇充分混匀,放置-20℃沉淀(时间越长,沉淀越充分,可过夜);

6、12000rpm离心10mins;

7、去上清,用500ul 70%乙醇洗涤,离心1-2mins;

8、去乙醇,干燥

9、加入100ulddH2O+3ul RNase溶解。

CTAB配制 1L (室温保存):

CTAB(非离子型去污剂十六烷基三甲基溴化铵)

15g 1M Tris-HCl(PH8.0)

75ml 0.5M EDTA (PH8.0)

30ml

NaCl

61.4g

add ddH2O to

1L

注意:配制时须加热50℃水浴溶解。

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