TPS法提取植物DNA
1、取少量叶片置2ml管子中,加入钢珠;
2、加入400-500ul TPS;
3、粉碎机粉碎,75℃水浴30mins;
4、12000rpm离心10mins;
5、取上清(200ul)至96孔板中,4800rpm离心5mins;
6、取上清(约100ul)至新96孔板中,加等体积异丙醇(用排枪)(先将异丙醇加入96孔板,再加上清,吹打);
7、用保鲜膜包好,放置-20℃ 0.5h以上;
8、12000rpm离心5mins,去上清;
9、加入200ul 75%酒精,静置10mins,离心2mins,去酒精,干燥;
10、加50ul ddH2O,混合均匀,离心。
TPS配方
100ml 1M (PH8.0) Tris-HCl
10ml 0.5M EDTA (PH8.0)
2ml KCl
7.45g ddH2O
至100ml
真菌DNA抽提方法-----CTAB法
1、从PDA培养基上取菌丝至1.5ml管中,液氮研磨;
2、加入CTAB buffer 300ul, 70℃烘箱放置1h;
3、加入等体积的氯仿充分vortex涡旋震荡混匀;
4、12000rpm,10mins;
5、取上清液(约200ul),加入等体积异丙醇充分混匀,放置-20℃沉淀(时间越长,沉淀越充分,可过夜);
6、12000rpm离心10mins;
7、去上清,用500ul 70%乙醇洗涤,离心1-2mins;
8、去乙醇,干燥
9、加入100ulddH2O+3ul RNase溶解。
CTAB配制 1L (室温保存):
CTAB(非离子型去污剂十六烷基三甲基溴化铵)
15g 1M Tris-HCl(PH8.0)
75ml 0.5M EDTA (PH8.0)
30ml
NaCl
61.4g
add ddH2O to
1L
注意:配制时须加热50℃水浴溶解。