不规则抗体筛查试验操作规程
1.目的 为规范红细胞不规则抗体筛选、鉴定的技术操作，保证检查结果准确和临床输血安全、有效，依据《输血实验室管理程序》有关条款的要求制定本规程。
2.适用范围 本规程适用于本院红细胞不规则抗体的筛查。
3.职责 输血科具有专业技术资格的人员负责红细胞不规则抗体的筛选和鉴定，但只对所筛选或鉴定的标本负责。
4.相关文件
试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序
5.相关记录
仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录
6.实验原理
采用盐水介质法、凝聚胺法或抗球蛋白法等试验使受检者血清（血浆）与筛选红细胞反应，检测受检者血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体，红细胞不规则抗体阳性者进一步与谱红细胞反应，根据反应格局鉴定抗体特异性。
7.仪器设备和检测环境
7.1.仪器设备等：玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 7.2.检测环境：室温应控制在18~27℃，湿度应保持在30~70%。
8.试剂
①生理盐水、凝聚胺试剂、直接抗人球蛋白试剂（抗IgG,C3d），均为有合格证件的正品。 ②市售O型筛选红细胞：为三支以上不同人份的3%筛选红细胞，均为有合格证件的正品。 或自制O型筛选红细胞：选择已确认ABO血型为O型的健康者，采集EDTAK2抗凝血标本离心，取少许红细胞置于试管中，用生理盐水离心洗涤3次得压积红细胞[3400转/分钟（1000g），每次离心1分钟，离心后将上清液全部倒出]，再取30µl游离红细胞加入到标记为Ⅰ号的试管中，然后加入1ml生理盐水混匀，即得Ⅰ号O型3%的筛选红细胞；依同样方法分别制备不同人份的Ⅱ号和Ⅲ号O型3%的筛选红细胞。
9.血标本的处理
将受检者血标本离心分离出血清（血浆）和压积红细胞，血清（血浆）备用；再吸取30µl压积红细胞中的游离红细胞，加入1ml生理盐水中，混匀配成3%的自身对照红细胞悬液备用。
10.实验方法与步骤 10.1.盐水介质法
①取4支干净试管，分别标记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和自身对照； ②每管中先各加入2滴受检者血清（血浆）；
③再分别加入1滴对应的3%的Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号筛选红细胞和自身对照红细胞悬液； ④混匀后，用交叉配血专用离心机120 g离心1分钟；
⑤先肉眼观察溶血情况，再轻轻充分混匀后，用肉眼或光学显微镜观察凝集情况，并记录。 ⑥结果判读：
自身对照管和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号管均无凝集者，为不规则抗体筛查阴性，表明未检出红细胞不规则抗体；
自身对照管和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号管均凝集者，为不规则抗体筛查阳性，表明受检者血清（血浆）中含冷自身抗体或同时伴有同种免疫性红细胞不规则抗体；
自身对照管无凝集，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号管中至少有1管出现凝集，为不规则抗体筛查阳性，表明受检者血清（血浆）中含IgM同种免疫性红细胞不规则抗体。
10.2.凝聚胺法
①盐水介质法筛选红细胞不规则抗体试验结束后转做凝聚胺法试验，具体执行《凝聚胺法交叉配血试验操作规程》。 ②结果判读：
自身对照管和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号管均无凝集者，为不规则抗体筛查阴性，表明未检出红细胞不规则抗体；
自身对照管和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号管均凝集者，为不规则抗体筛查阳性，表明受检者血清（血浆）中含IgG自身抗体或同时伴有IgG同种免疫性红细胞不规则抗体；
自身对照管无凝集，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号管中至少有1管出现凝集，为不规则抗体筛查阳性，表明受检者血清（血浆）中含IgG同种免疫性红细胞不规则抗体。 10.3.直接抗人球蛋白法 ①盐水介质法筛选红细胞不规则抗体试验结束后转做直接抗人球蛋白试验，具体执行《直接抗人球蛋白试验操作规程》。
