2012年上学期创新型试验计划
辞别2011，喜迎2012.
一年之计在于春，对这学期的创新型实验展望，我的计划如下：
一、全程细胞培养的一个复习、熟练、巩固。上学期的细胞培养过程中 存在很多问题，细胞再三被污染，虽动手操作的机会不多，可具体原因，具体分析并加以改正解决，做得不够，试剂的交叉污染问题一直存在。这学期不仅要全程参与，还要遇到问题，立即分析解决，详细做好实验记录，药品试剂的规制要有条有序。主要内容包括：一起的洗涤和维护，试剂的配制，细胞复苏，细胞计数，原代培养，传代培养，细胞冻存。
二、药物检测。这项内容在网上或书上查阅。
Mtt法检测细胞存活及生长：其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
实验步骤（贴壁细胞）：
1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。
2.、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况
3.、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5、终止培养，小心吸去孔内培养液。
6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）
三、希望我们实验组能够多做一些除细胞培养以外其他实验，比如：物质提取分离纯化，酶，微生物登的研究。
