同型对照
同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的，而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体，与功能阻断抗体发挥同样的功能。 同型对照要与一抗的来源，Ig分型和标记完全一致。
同型对照（Isotype Control）：使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的 背景染色。如果一抗是多抗，可以用an normal serum（与一抗相同的正常血清） （must be the same species as primary antibody）。This control is easy to achieve and can be used routinely in immunohistochemical staining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同，应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来 调整背景染色。举个例子：比如检测一抗为单抗的mouse anti rat CD11b，clone OX-42 purified IgG，那么它的isotype 是mouse IgG2a， 所以可以用purified（纯化的） mouse IgG2a来做OX-42的同型对照（Isotype Control）。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。
同型对照：是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类，若使用直接免疫荧光染色法，同型对照也应标记荧光色素，如IgG1 FITC、IgG2ａ、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外，同型对照与MoAb所标记的荧光 色素、浓度、F：P比值（标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值）应该相同为最佳，这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义，切忌使用与MoAb不相 匹配的同型对照，最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备（如同一品牌）的产品。
流式同型对照
一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56 APC标记的抗体，成份是Mouse IgG1,&；kappa；。那么它的同型对照应该是APC标记的Mouse IgG1,&；kappa；。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体，成分是MouseIgG1,&；kappa；。它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,&；kappa；。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1。那么染色方式如下：样本管：纯化的CDw25＋PE标记的抗Mouse IgG1＋样本同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同--亚型不同--相同类别。比如，某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,&；kappa；。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2а为同型对照。如果也没有找到Mouse IgG2а，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到Mouse IgG2b，那么选者相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。
由于抗体与细胞间存在非特异性结合（如电荷间互吸等），流式抗体与细胞结合时有特异性结合部分和非特异结合部分,流式同型对照试剂 用于消除非特异结合所至非特异染色，严格来说，同型对照应该是同一抗原抗体制备的生产厂家，同一种属动物来源，同一种免疫球蛋白（包括亚型），同一荧光标记，作用类似调零（一般阳性率控制在1~2%内）。特别是多标调荧光补偿时，做为参考。 荧光素直接标记一抗：FITC标记为例： 兔抗人的CD34/ FITC标记的抗体(荧光素直接标记一抗),抗体动物种属来源Rabbit IgG 抗体,它的同型对照应该是FITC标记的Rabbit IgG（亲和纯化IgG）。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的。 使用标记一抗：Rabbit Anti-CD34/FITC 荧光素标记兔抗人CD34抗体IgG 同型对照： Rabbit IgG/FITC 荧光素标记兔IgG 间接免疫荧光检测：PE标记为例 如果采用间接免疫荧光检测：一抗+荧光PE标记的二抗，抗体动物种属来源为小鼠抗人的CD4抗体+羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。 它的同型对照应该是：亲和纯化小鼠IgG+羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。 Mouse Anti-Human CD4 Monoclonal Antibody 小鼠抗人CD4抗体 同型对照： Mouse IgG + Goat Anti-mouse IgG/PE 纯化小鼠IgG +羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。
设同型对照的目的
一、为什么要用同型对照？
同 型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型 对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。
在流式细胞仪上样前，染色方式如下：样本管：一抗＋样本，同型对照管：同型对照＋样本
二、如何选择同型对照？
(1)一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56 FITC标记的抗体，成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是FITC标记的MouseIgG1,κ。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.(2)如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CD86的纯化抗体，成分是MouseIgG1,κ。它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,。那么染色方式如下：样本管：纯化的CD86＋PE标记的抗Mouse IgG1(二抗)＋样本,同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗MouseIgG1(二抗 )＋样本.(3)如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。比如，某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а为同型对照。如果也没有找到Mouse IgG2а，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到Mouse IgG2b，那么选者相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。
3、哪些客户需要使用同型对照？ A 对流式不是非常熟悉的客户。
B 做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。
C 使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户，因为客户不熟悉不常见标志的表达情况，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。
D 对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户，一般可以不使用同型对照。
4、为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高？
首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象。这个时候推荐使用其他阴性对照，如空白对照等。
