泉州师范学院教案
实验一
基本组织
【目的和内容】
1、观察各类上皮组织的结构特点；上皮组织游离面的某些特殊结构如纹状缘和纤毛；
2、重点观察疏松结缔组织的纤维及各种细胞成分，比较各种结缔组织的结构特点；
3、比较观察平滑肌、骨骼肌及心肌三种肌纤维纵切和横切的结构特点；
4、观察神经元的结构特点、尼氏体及神经原纤维的形态与分布；
5、观察突触及运动终板的形态结构。 【材料和用具】
显微镜、单层扁平上皮装片(硝酸银染色)、甲状腺切片(HE染色)、单层柱状上皮切片(小肠切片)(HE染色)、气管切片(HE染色)、复层扁平上皮切片(食管切片)(HE染色)和膀胱切片(HE染色)、疏松结缔组织装片(HE染色)、透明软骨切片(HE染色)、骨磨片、血涂片(瑞氏染色)、骨骼肌纵横切片(铁苏木精染色)、平滑肌分离装片(HE染色)、心肌纵横切片(铁苏木精染色)、脊髓灰质涂片(Nil染色)、脊髓横切片(Cajal银染色)、运动终板(氯化金法浸染的肋间肌)。 【操作】
一、上皮组织 (一) 单层扁平上皮
取单层扁平上皮装片或小肠、气管或其他器官切片(HE染色)观察。
1、单层扁平上皮装片
⑴ 低倍镜观察：选择染成淡黄色、标本最薄的部分进行观察
⑵ 高倍镜观察：在这种平铺片上可看到肠系膜的间皮细胞和肠系膜内毛细血管壁的内皮细胞，它们均为单层扁平上皮，在平铺片上，为其表面观，上皮细胞为多边形，细胞之间的边界由于硝酸银感光后沉淀为黑色，故细胞边界清晰，呈锯齿状，相邻细胞彼此相嵌，胞核扁圆形，位于细胞中央。硝酸银对胞核无银染作用，所以胞核为无色或淡黄色。
2、小肠、气管或其他器官切片观察
⑴ 低倍镜观察：寻找一个毛细血管横切面或纵切面观察，了解单层扁平上皮在切面上的形态。
⑵ 高倍镜观察：毛细血管壁只由一层内皮细胞构成，细胞很薄。胞核染成蓝紫色，长椭圆形，突向管腔。有的细胞切到核，有的没有切到。胞质染成红色，细胞界限在这种切片上不清晰。 (二) 单层立方上皮
用猫甲状腺切片(HE染色)观察。
1、低倍镜观察：在甲状腺切片上先找到大小不等的、内含红色胶状物质的甲状腺滤泡。
2、高倍镜观察：甲状腺滤泡壁为单层立方上皮细胞构成。胞核圆形，染成蓝紫色，位于细胞中央。胞质染成粉红色。细胞界限隐约可见。 (三) 单层柱状上皮
用单层柱状上皮切片或猫小肠切片(HE染色)观察。掌握单层柱状上皮在切面上的形状，并辨认纹状缘与杯形细胞。
1、肉眼观察：我们需要在粘膜层中观察上皮，所以，首先应辨别哪一层是粘膜。肠腔内表面具有突起，不平整的一面即为粘膜面。
2、低倍镜观察：粘膜面形成许多指状突起突向管腔。选择较完整的纵切突起，可见其表面覆有一层柱状上皮。
3、高倍镜观察：上皮细胞为柱状，胞核长椭圆形，染成蓝紫色，位于细胞的基底部分。把显微镜的虹彩光圈缩小，减少光量，可见细胞的游离面有一层较亮的粉红色膜状结构，即纹状缘。在柱状细胞(吸收细胞)之间散在有杯形细胞。此细胞上端膨大，下端细小，胞核呈三角形或半圆形，位于细胞的基底部。在杯形细胞上端的胞质内有粘液分泌颗粒，在切片上呈卵圆形空泡状结构。若切片正垂直切着杯形细胞，则可见其游离面无纹状缘。但大部分由于切斜，故看不到其游离面或基底部，只见一个个椭圆形或圆形空泡。 (四) 假复层纤毛柱状上皮
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取兔气管切片(HE染色)观察。
1、肉眼观察：先辨别朝向气管腔的粘膜层。
2、低倍镜观察：管壁粘膜的最内面着色较深的一层是假复层纤毛柱状上皮。细胞排列紧密，界限不清楚，其间夹有透亮的杯形细胞。细胞核位臵高低不等。
3、高倍镜观察：依上皮细胞的形状、胞核所处的位臵及细胞顶端所达到的部位，可分为四种细胞。
① 基细胞(锥体细胞)：细胞呈锥体形，基部宽，顶部窄，不能达到上皮游离面。胞核排列于整个上皮的下部。 ② 梭形细胞：细胞的两端尖细，中间略宽，这种细胞不太容易辨认。其胞核排列于整个上皮的中部。 ③ 柱状细胞：胞体抵达上皮游离面，细胞游离面较宽，基部较细。细胞的游离面有微细而整齐的纤毛，因此整个上皮的游离面被排列紧密的纤毛覆盖。其胞核排列于整个上皮的上部。 ④ 杯形细胞：夹于柱状细胞之间，游离面无纤毛。胞核也排列于整个上皮的中部。 (五) 复层扁平上皮
取复层扁平上皮切片或食管切片(HE染色)观察未角化复层扁平上皮的结构。
1、肉眼观察：先辨别朝向食管腔的粘膜层。
2、低倍镜观察：管壁粘膜的最内面着色较深的一层即复层扁平上皮，可见由数层至十几层细胞组成，有的地方较厚，有的地方较薄，所以基底面呈波浪状。
3、高倍镜观察：和结缔组织交接的最深的一层细胞呈低柱状，细胞排列紧密，胞核椭圆形，染色深，位于细胞基底部。中层为几层多角形细胞。接近表面的细胞渐变为扁平状细胞。 (六) 变移上皮
取膀胱变移上皮切片或用排空状态下取材制作的兔膀胱切片(H-E染色)观察它的形态特点，并比较其与复层扁平上皮的区别。
1、肉眼观察：辨别朝向膀胱腔的粘膜层。
2、低倍镜观察：在粘膜层表面寻找上皮，可看到上皮细胞排列层次较多，表层细胞较大，深层细胞较小。
3、高倍镜观察：基层细胞最小，呈近似立方形，排列较密。中层细胞呈多角形或倒臵的梨形。表层细胞较大，为较阔的方形，游离面略呈弧形，靠游离面的胞质着色深，有的细胞可以看到双核。
二、结缔组织 (一) 疏松结缔组织
取疏松结缔组织装片观察。
1、低倍镜观察：选择标本较薄而又均匀处观察，可见交叉成网的纤维及散在分布于纤维之间的结缔组织细胞。 2．高倍镜观察：先区分纤维，然后区分细胞。用此法可显示胶原纤维及弹性纤维。在纤维之间散布有结缔组织细胞，在此主要要求分辨成纤维细胞及巨噬细胞。(4种结构均可见) (1) 胶原纤维：被染成粉红色的粗细不等的细带状。它们相互交叉排列，数目较多。胶原原纤维分辨不清。有时胶原纤维呈波浪状。
(2) 弹性纤维：在HE染色的切片中呈淡红色，其断端常呈卷曲状。比胶原纤维细，单条，有分支，连结成网。 (3) 成纤维细胞：数目最多，胞质染色淡，轮廓不甚明显，仔细观察呈多突扁平状。胞核大，多为椭圆形，染成蓝紫色。
(4) 巨噬细胞：细胞形状不一，呈圆形、椭圆形或不规则形。胞质染色较深，细胞轮廓较成纤维细胞清楚。胞核较小，为圆形、椭圆形或肾形，胞核染色也较深，为深蓝紫色。 (二) 软骨
用透明软骨切片或兔气管切片(HE染色)观察，了解透明软骨的结构特点。
1、肉眼观察：气管壁内的蓝紫色“C”字形结构为透明软骨，即气管软骨。
2、低倍镜观察：在透明软骨中可见染成蓝紫色的基质和位于陷窝内的软骨细胞。在软骨中央部分的软骨细胞较大，呈椭圆形或圆形，经常2～4个成群存在。近边缘的软骨细胞较小而密集，细胞成梭形，其长轴与软骨表面平行排列。软骨周围包有一层染成淡红色的致密结缔组织的软骨外膜。
3、高倍镜观察：在HE染色切片中看不到细胞间质内的胶原纤维。基质染成蓝紫色，在陷窝周围的基质染色
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较深，称软骨囊。有的切片由于在制作过程中软骨细胞脱落，使基质中显现出一个个白色空腔，即软骨陷窝。有的切片由于在制片过程中使部分软骨细胞有所收缩，所以在软骨细胞周围出现白色间隙，这也应是陷窝的一部分。 (三) 骨组织
取未经染色的人骨横磨片观察。这种磨片是用腐胔的股骨的骨密质部分锯成薄片，再用磨石磨成。骨组织内的软组织(神经、血管、淋巴管、结缔组织)及细胞都已腐烂，仅留下空腔和管道。因光线折射关系，这些空腔和管道均呈现黑色，观察时可缩小显微镜的虹彩光圈使光线稍暗些，更为清晰。
1、低倍镜观察：可见许多骨板呈多层同心圆排列的结构，即骨单位(哈弗斯系统)。每个骨单位的中央有一个黑色、较大的圆形管道的横断面即为中央管(哈弗斯管)，在此管周围有许多成同心圆排列的骨单位骨板(哈弗斯骨板)。
有的骨磨片还可看见中央管之间相连的管。若骨磨片取材完整，还可看到内、外环骨板及横向穿行于内、外环骨板的穿通管。在骨单位之间，还可看到一些排列不规则的骨板，即间骨板。
2、高倍镜观察：骨板内或骨板间有许多扁的卵圆形呈黑色的小腔隙即骨陷窝。骨陷窝向四周发出许多细小的黑色分支，即骨小管。还可见相邻骨陷窝之间的骨小管是彼此相通连的，靠近中央管的骨小管则和中央管相通连。 (四) 血液
1、低倍镜观察：分辨红细胞和白细胞
2、高倍镜观察：
⑴ 红细胞：数目最多，小而圆，无胞核，浅红色，中央部分着色比周围浅。 ⑵ 白细胞：
中性粒细胞：数目较多，其胞质中含有细小且分布均匀的浅紫红色中性颗粒。胞核蓝紫色，分叶，叶间有染色质丝相连。
嗜酸性粒细胞：数目较少，胞质中有许多粗大的被染成桔红色的嗜酸性颗粒。胞核紫红色，也分叶，通常分两叶。
嗜碱性粒细胞：数目很少，在涂片上较难找到。胞质中含有许多大小不等、被染成蓝紫色的嗜碱性颗粒。胞核不规则，染成浅紫红色，常被嗜碱性颗粒掩盖。
淋巴细胞：数目较多，可见中、小淋巴细胞。小淋巴细胞的大小与红细胞差不多，核圆有侧凹，占细胞的大部分，染色质致密呈块状，着色深。胞质极少，仅在核周形成一薄层，强嗜碱性，染成天蓝色。中型淋巴细胞比红细胞大，胞质较多，着色较浅，有的胞质内可见少数细小的紫红色嗜天青颗粒，胞核圆形或近似肾形，染色也很深。
单核细胞：数目少，是血液中形体最大的细胞。核大，呈肾形、马蹄形或不规则，染色质颗粒细而松散，着色浅，常偏位。胞质丰富，弱嗜碱性，染成浅灰蓝色，内含许多细小的嗜天青颗粒。
⑶ 血小板：为不规则形小体，直径约2-3µm，常聚集成群。血小板周围部分为浅蓝色，中央有细小的紫红色颗粒。
三、肌肉组织 (一)平滑肌
1.取平滑肌分离装片观察
① 低倍镜观察：找到有平滑肌纤维的部位。
② 高倍镜观察：平滑肌纤维为梭形，胞核长椭圆形，被染成深蓝紫色，其宽度几乎等于平滑肌纤维的宽度。胞质染成红色。
2.取平滑肌纵横切片 (HE染色)观察
① 低倍镜观察：观察纵切面平滑肌纤维呈梭形；横切面呈大小不等、不规则的圆形。 ② 高倍镜观察：注意比较纵切面和横切面上结构的差异。
a.纵切面：平滑肌纤维为梭形，胞核长椭圆形或杆状，被染成深蓝紫色，其宽度几乎等于平滑肌纤维的宽度。
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胞质染成红色。
b.横切面：可见到许多染成蓝紫色圆形的胞核，其周围包有染成红色的胞质，这便是切到平滑肌纤维中拥有胞核部分的横切面。另外，还可见到大小不等的、仅有红色胞质的平滑肌纤维的横切面，这是因为没有切到胞核的缘故。 (二) 骨骼肌
猫骨骼肌纵、横切片(铁苏木精染色)的观察；掌握骨骼肌纤维的一般形态(胞核的位臵及明暗相间的横纹)。
1、低倍镜观察：找到纵切(肌纤维长条形)及横切(肌纤维多边形)的肌纤维。在肌纤维间有结缔组织。
2、高倍镜观察：注意比较纵、横切面上结构的差异。
① 纵切面：肌纤维长条形，外为肌膜，紧贴肌膜内方，有许多染成蓝紫色的卵圆形胞核。肌原纤维沿着肌纤维长轴排列，有明显的横纹，染色深的为A带，染色浅的为I带。若切片染色较好，还可看到I带内的Z线和A带内的H带(最好用油镜观察)。
② 横切面：肌纤维呈多边形或不规则圆形，外有肌膜，卵圆形的胞核紧贴肌膜内侧。肌原纤维呈小蓝点状，在肌质内排列不均匀，所以在横切面上呈现出肌原纤维的小区。 (三) 心肌
取猴或狗心肌切片(铁苏木精染色)观察。
1、低倍镜观察：作心肌切片宜取心室肌为材料，由于心室肌分多层，所以在切片上可看到纵、横、斜等切面。纵切面心肌纤维为有分支的带状，横切面心肌纤维为不规则的圆形。
2、高倍镜观察：在纵切面上，心肌纤维彼此分支吻合成网状。胞核卵圆形，位于纤维中央。把显微镜的虹彩光圈缩小，光线放暗一些，可见到心肌纤维的横纹，但不如骨骼肌纤维明显。在肌纤维及其分支上可见染色呈深蓝色的梯形横线，即为闰盘。肌纤维之间有结缔组织及血管。
在横切面上，心肌纤维为不规则的圆形。有的有胞核，有的则无，这是由于切片切到或没切到胞核的缘故。
四、神经组织 (一) 多极神经元
取牛的脊髓灰质涂片(Nil染色)观察。因为是涂片，所以可以较完整地显示出神经元的结构。这种染色可以把胞核及尼氏体（Nil’s body）染成蓝色。
1、低倍镜观察：可见染成深蓝色、具有多个突起的多极神经元。选一个较大而清晰的神经元换用高倍镜观察。
2、高倍镜观察：可见多角形的胞体。在胞体内有圆球形染色较浅的胞核，其中央有一染成深蓝色的核仁。胞质内含有许多不规则的染成深蓝色的小块，即尼氏体。胞体周围发出许多突起，这些突起大多为树突，因为轴突只有一根，所以在涂片上有时很难看到。尼氏体在树突内为条状。胞体在一呈圆锥形区域无尼氏体，此处即是轴丘。如看到与轴丘相连的突起，便可断定其为轴突。轴突及轴丘内无尼氏体。 (二) 神经原纤维及突触
取猫脊髓横切片(Cajal银染色)观察。在这张切片上可同时观察到神经原纤维及终结的形态。
1、肉眼观察：脊髓横切面中央呈“H”形，染成棕黄色的部分为灰质，灰质较宽的一端为脊髓灰质前角。 2．低倍镜观察：在灰质前角处可见大而呈多角形有突起的细胞，为多极神经细胞。找一个突起较多并切到胞核的神经细胞，换用高倍镜观察。
3、高倍镜观察：可以看到胞体和突起内均有棕褐色细丝状的结构，此即神经原纤维。它们在胞体内排列成网状，而在突起内则平行排列。
若切片银染色适当，还可看到在胞体或树突上有许多黑色的小圈状或扣环状结构(形似蝌蚪)，即为终结，是光镜下所见到的形成突触的部位。 (三) 运动终板
取运动终板或运动神经末梢装片观察。
1、低倍镜观察：骨骼肌纤维呈浅蓝紫色，有的呈紫红色。肌原纤维的横纹清晰可见。神经和神经纤维呈黑色。神经纤维的末端成爪状分支，附于肌纤维表面，与肌纤维附着处形成的椭圆形板状隆起，即为运动终板。
2、高倍镜观察：可见运动终板的爪状分支末端常呈钮扣状膨大。
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【思考题】
1、什么是上皮、内皮及间皮？
2、举例说明上皮组织的结构与机能的统一性。
3、疏松结缔组织有哪些细胞及纤维成分？这些细胞及纤维各有什么结构特点？
4、试述三种肌组织在结构上有什么不同。（列表）
5、明确神经原纤维、神经纤维、突触、神经末梢、感受器和效应器的概念。
6、绘一多极神经元图，并注明各部结构。
7、神经纤维如何形成一条神经? 【作业】
1、绘图：绘单层柱状上皮光镜图，并注明各部结构。
2、列表比较三种肌组织在结构上的异同点。
