心 得 体 会
1.分子生物学 （molecular biology）是一门很专业很抽象很前沿的学科，想学好它其实并不容易，它不象人体解剖学那样直观，不象生理学那样有条理化，更不象内外科那样有吸引力．很多医学大学生三羧酸循环学得很好，甚至很精，但对于后面的分子生物学，即基因信息传递一章却感到非常头痛，很多大五学生在考研时考虑到分值较小而干脆放弃对这一章的复习．其实大家只要强制自己静下心来花点时间先认真看好书本上分子生物学的第一章，即DNA的生物合成，当你对这一章看进去了，并且基本上看出了头绪，我相信你一定有信心有兴趣继续看下去，并且最好是连贯性地系统性地看后面的，争取一次性地看完分子生物学这一篇，用通俗的话说就是花大力气啃掉这块硬骨头．如果中途有特殊情况，那么间隔时间最好不要超过两天，否则你前面辛辛苦苦培养出来的兴趣将会消失的一干二净，你又将回到从前讨厌分子生物学的状态．分子生物学理论学习只有通过自己看书理解才能掌握。
2.生命科学发展日新月异，特别是微观生物学的发展速度可谓惊人。作为一名本科生，最重要的就是掌握了基础知识，为今后的科研工作或是研发工作打下基础，这样才能跟得上知识和信息发展的脚步。分子生物学作为微观生物学的根基，学好它无疑将为将来的发展打下最坚实的基础。通过一个学期的分子生物的学习，我认为收获主要在于以下几点：第一，掌握了以中心法则为核心的最基本的分子生物学知识。围绕着中心法则，我们学习了DNA复制、转录、翻译的机制，从根本上了解了中心法则的作用机理。真正理解了蛋白的表达过程是一个多分子协同作用的结果，每一步都经过着严格的调控，对这些基本概念和过程的理解为今后的科研奠定了基础。第二， 了解了基因表达调控的基本原理。研究真核生物的基因表达调控网络对于从分子水平了解真核生物，特别是人类的发育过程至关重要，同时为通过基因治疗来治愈人类疾病提供最根本的理论依据。分子生物课很大篇幅都在向我们介绍基因表达调控，让我们从启动子、转录因子、翻译后修饰、蛋白降解控制等多个层面全面的了解了控制基因表达的“层层关卡”。第三， 锻炼了专业英语阅读和写作能力。目前世界上最先进的分子生物学理念，最前沿的分子生物进展往往都呈现在英文教科书、英文文献上，因此提高自己的专业英文素养刻不容缓。通过学习，我们基本掌握了分子生物学最基础的词汇，具备了阅读一些最经典的外文教科书，以及一些较为简单的英文文献的能力，这点将为我们今后的学习深造打下坚实基础。第四， 接触了微观生物学前沿，培养了一定的科研思维能力。现在的分子生物学发展日新月异，一些被认为是亘古不变的真理，随时都接受着最新研究成果的挑战。通过分子生物学课的学习，我们了解到了目前微观生物学的前沿都有哪些方面，真正让我们在掌握基础知识的同时开拓了眼界。这其中就包括干细胞工程、microRNA的功能、肿瘤标记的探究等。当然，通过这些训练我们也逐步锻炼自己的科研思维，知道要解决一个问题应该从哪些方面下手，如何去丰富自己，这点至关重要。学习分子生物学提高了我们的微观生物学素养，为今后的进一步学习打下了坚实基础，同时了解了最新的微观生物学进展，让我们对生物学科研有了一定的感性认识。
应
用
随着对各种疑难疾病的深入研究，和分子生物学日新月异的发展，传统的诊断治疗手段无法解决的一些重要问题。通过对生物体在分子水平上的研究，基因诊断与治疗的作用逐渐显露出来，尤其是许多遗传疾病。
传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为依据，如患者的症状、血尿各项指标的变化，或物理检查的异常结果，然而表型的改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生的一定时间后才出现，因此常不能及时作出明确的诊断。现知各种表型的改变是由基因异常造成的，也就是说基因的改变是引起疾病的根本原因。基因诊断是指采用分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的结构（DNA水平）或功能（RNA水平）是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断。基因诊断有时也称为分子诊断或DNA诊断(DNA diagnosis)。基因诊断是病因的诊断，既特异又灵敏，可以揭示尚未出现症状时与疾病相关的基因状态，从而可以对表型正常的携带者及某种疾病的易感者作出诊断和预测，特别对确定有遗传疾病家族史的个体或产前的胎儿是否携带致病基因的检测具有指导意义。 2．基因诊断的原理与方法 2.1 基因诊断的原理
疾病的发生不仅与基因结构的变异有关，而且与其表达功能异常有关。基因诊断的基本原理就是检测相关基因的结构及其表达功能特别是RNA产物是否正常。由于DNA的突变、缺失、插入、倒位和基因融合等均可造成相关基因结构变异，因此，可以直接检测上述的变化或利用连锁方法进行分析，这就是DNA诊断。对表达产物mRNA质和量变化的分析为RNA诊断(RNA diagnosis)。
2.2 基因诊断的方法
基因诊断是以核酸分子杂交(nucleic acid molecular hybridization)和聚合酶链反应（PCR）为核心发展起来的多种方法，同时配合DNA序列分析，近年新兴的基因芯片可能会发展成为一种很有用的基因诊断方法。
DNA诊断
常用检测致病基因结构异常的方法有下列几种。
⑴斑点杂交：根据待测DNA 样本与标记的DNA探针杂交的图谱，可以判断目标基因或相关的DNA片段是否存在，根据杂交点的强度可以了解待测基因的数量。
⑵等位基因特异的寡核苷酸探针（allele-specific oligonucleotide probe, ASO probe）杂交：是一种检测基因点突变的方法，根据点突变位点上下游核苷酸序列，人工合成约19个核苷酸长度的片段，突变的碱基位于当中，经放射性核素或地高辛标记后可作为探针，在严格杂交条件下，只有该点突变的DNA样本，才出现杂交点，即使只有一个碱基不配对，也不可能形成杂交点。一般尚合成正常基因同一序列，同一大小的寡核苷酸片段作为正常探针。如果受检的DNA样本只能与突变ASO探针，不与正常ASO探针杂交，说明受检二条染色体上的基因都发生这种突变，为突变纯合子；如果既能与突变ASO探针又能与正常ASO探针杂交，说明一条染色体上的基因发生突变，另一条染色体上为正常基因，为这种突变基因的杂合子；如果只能与正常ASO探针杂交，不能与突变ASO杂交，说明受检者不存在该种突变基因，如图21-1所示。
若与PCR方法联合应用，即PCR/ASO探针杂交法(PCR/ASO probe hybridization)，是一种检测基因点突变的简便方法，先用PCR方法扩增突变点上下游的序列，扩增产物再与ASO探针杂交，可明确诊断突变的纯合子和杂合子。此法对一些已知突变类型的遗传病，如地中海贫血、苯丙酮尿症等纯合子和杂合子的诊断很方便。也可分析癌基因如H-ras和抑癌基因如p53的点突变。
⑶单链构象多态性（single strand conformation polymorphism, SSCP）分析相同长度的单链DNA因其序列不同，甚至单个碱基不同，所形成的构象不尽相同，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时速度就不同，若单链DNA用放射性核素标记，显影后即可区分电泳条带。一般先设计引物对突变点所在外显子进行扩增，PCR产物经变性成单链后进行电泳分析。PCR/SSCP方法，能快速、灵敏、有效地检测DNA突变点，如图21-2，此法可用检测点突变的遗传疾病，如苯丙酮尿症、血友病等，以及点突变的癌基因和抑癌基因。
⑷ 限制性内切酶图谱（restriction map）分析，如果DNA突变后改变了某一核酸限制性内切酶的识别位点，使原来某一识别位点消失，或形成了新的识别位点，那么相应限制性内切酶片段的长度和数目会发生改变。一般基因组DNA经该种限制性内切酶水解，再做Southern印迹，根据杂交片段的图谱，可诊断该点突变，如图21-3所示。如果用PCR扩增该突变点的外显子，PCR产物经该种酶消化后，进行琼脂糖电泳，溴乙锭染色后可直接观察片段的大小及数目。此法可用于检测有些限制性内切酶识别位点消失的遗传疾病，如镰状细胞贫血。或基因缺失的疾病如α地中海贫血症，单纯性生长激素缺乏症等。
⑸限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism ,RFLP）遗传连锁分析人群中个体间DNA的序列存在差异，据估计每100-200个核苷酸中便有1个发生突变，这种现象称为DNA多态性。有些DNA多态性可改变某一限制性内切酶的识别位点，因而产生了DNA限制性片段长度多态性。RFLP按孟德尔方式遗传，在某一特定的家庭中，如果某一致病基因与特定的多态性片段连锁，可以遗传给子代，因此这一多态性片段可作为遗传标记，来判断该家庭成员或胎儿的基因组中是否携带该致病基因，见图21-4，此法可用于诊断甲型血友病、苯丙酮尿症、享延顿舞蹈病等。
⑹ DNA序列分析对致病有关的DNA片段进行序列测定，是诊断基因异常（已知和未知）最直接和准确的方法 6．结论
随着“人类基因组计划”的完成（即在阐明人类基因组DNA3*109核苷酸的序列，阐明所有人类基因并确定其在染色体的位置）和“后基因计划”的实施（即是对基因功能的研究和基因与人体疾病的研究），分子生物学技术将会越来越普及，方便地运用到基因诊断领域。
虽然目前对DNA芯片的应用仍大多停留在实验室研究阶段，由于技术复杂、成本高、离临床检验及疾病诊断的普及性应用还有一段距离。但是可以预见，随着现代生物科学和其他学科技术的不断发展和完善，在不久的将来，即可把所有的基因都固定于1块芯片上时，就成了一块多基因疾病检测得万能芯片，它可适用于任何多基因疾病的检测，为临床检测工作带来极大的便利。
总之，分子生物学和分子遗传学的飞速发展必将极大地促进基因诊断技术的进步，有理由相信，以基因诊断为基础的基因治疗必将成为人类治疗自身疾病的主流技术，并极大地促进人类卫生事业的进步。
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