自来水中细菌总数的测定
姓名：高海艳指导教师：陈燕飞
（太原师范学院 生物系111班 学号 2011131140）
摘要 本实验通过平板菌落计数技术测定了水中细菌总数，从而测定水被有机物污染的程度。细菌数越多，有机物含量越大，水的污染程度越重。本实验测得的实验结果如下：1ml水样中细菌总数为73个，该自来水样符合《生活饮用卫生标准》中规定的1ml水中细菌总数为60-90个。由于水中细菌种类繁多，他们各自对营养和其他生长条件的要求差别很大，因此本实验采用普通营养琼脂培养基，该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。
关键词 自来水; 普通营养琼脂培养基;细菌总数
Determination of the total number of bacteria in tap water
AbstractThis experiment measured plate count technique total number of bacteria in water, thereby determining the degree of organic pollution of water is.The more the number of bacteria, organic matter content is, the more severe water pollution.The experimentally measured results are as follows: 1ml total number of bacteria in water samples was 73, the tap water samples meet the \"drinking health standards\" set forth in the total number of bacteria in the water 1ml of 60-90 months.Since a wide variety of bacteria in the water, their respective growth conditions on the nutritional and other requirements vary greatly, so this experiment using ordinary nutrient agar medium which nutrient-rich, enabling the growth of most bacteria.KeywordsWater; ordinary nutrient agar; bacterial count
引言 随着工业的大规模发展，环境污染也越来越严重，尤其是水。水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而要判断水质的标准，测定水中微生物的数量、种类是必须的。各种天然水中常含一定数量的微生物，水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。人们通常饮用的是自来水，自来水是指通过水处理厂净化、消毒后生产出来的符合国家饮用水标准的供人们生活、生产使用的水。我国饮水卫生标准规定每毫升水样细菌总数37度培养24个小时不得大于100个[3]。微生物学指标是评价水中生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验试剂
普通营养琼脂培养基、自来水
1.1.2 实验仪器
高压蒸气灭菌锅、培养皿、吸管、玻璃棒、瓷缸、电热炉、电子秤
1.2 实验方法
1.2.1水样的采取
先将自来水龙头放水5min后，以干净的烧杯接取水样，以待分析。
1.2.2 制作固体培养基
1.2.3 高压蒸汽灭菌
1.2.3.1 将内层锅去处，再向外层锅中加入适量的水，使水面与三角架相平为宜。
1.2.3.2放回内层锅，并加入要灭菌的培养皿、试管、烧杯等物品（注意不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果）。
1.2.3.3加盖，并将盖上的排气管插入内层的排气槽内，再2两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
1.2.3.4本实验用0.1MPa，121.5℃，20min灭菌。灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
1.2.4 细菌总数的测定
1.2.4.1用灭菌吸管吸取1mL水样，注入灭菌培养皿中，共做五个平板。
1.2.4.2分别倾注约15mL已溶化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即在桌上做平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
1.2.4.3另取一空的灭菌培养皿，倾注营养琼脂培养基15mL，作空白对照。
1.2.4.4培养基凝固后，倒置与37℃温箱中，培养24h，进行菌落记数。四个平板的平均菌落数即为1mL水样的细菌总数。
2 结果与分析
自来水中菌落数表
平板
1 2
空白对照
由上表可得：1ml自来水中细菌总数=[(67-26)+(90-26)]/2=73个
根据国家卫生标准可饮用水中的细菌个数为每毫升不大于100个，而此自来水样中的细菌个数为73个，低于100个，故该自来水水质合格。 菌落数679026
3 讨论
作对照的培养皿中菌落数目偏多，是培养皿在空气中放置时间过长已经沾染了一些杂菌而造成的。
由于培养基是倒置的，所以可以观察到绝大多数的细菌着生在培养基表面。这是由于菌种在固体培养基上借助重力作用而形成的，有利于菌落计数。
倒置培养基时应降温至45 ℃，以免温度过高烫死大肠杆菌。切记不能过低，防止培养基凝固。倾注培养基后要将平皿在桌面上做匀速旋转，将培养基和自来水样摇匀，在培养基中观察时可见一些菌苔就是平皿没有摇匀的结果。
5 结语
细菌是微生物界的一个大类群，它与人类的生活密切相关，其中有的有益，有的有害，为了我们更好的生活，我们必须研究细菌，并掌握一些方法技术，来使细菌向人类有用的方面发展。
通过此实验，我们可知平板菌落计数法是测定水样中细菌个数比较方便的方法，但它也存在不准确的因素，比如在数菌落时，菌落太小且又处于培养基内部这样就不能观察到菌落从而影响结果，又如在培养过程中由于细菌之间的相互抑制也会使计数菌落减少。
近年来随着环境污染加重我国水质不断下降，给居民饮水安全带来隐患。因此，我们想通过测定自来水中的细菌总数，了解水质情况，呼吁人们保护水资源。本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
参考文献
[1] 沈萍、陈向东主编《微生物学实验》第四版（第二部分）。高等教育出版社，2007.［2］ 曲音波.《微生物技术开发原理》北京：化学工业出版社，2005.
［3］ 卫扬保 .《微生物生理学》北京：中国科学技术出版社，1992
