微生物实验复习
1.微生物实验室的注意事项是什么？
答：防止病原微生物的散布，防火，节约，标记，记录，安全，清洁与秩序。
2.观察常用什么显微镜？它主要有哪几部分组成？
答：观察细菌常用普通光学显微镜（油镜）。它主要有光学部分和机械部分组成，光学部分由目镜、物镜、反光镜和聚光器组成：机械部分由镜座、镜筒、镜臂、转换器，镜台、粗细调节器。
3.使用油镜时用什么作为物镜与玻片间的介质，有几种？
答：加拿大树胶、二甲苯、石蜡、松柏油、甘油、水、香油
4.观察细菌时显微镜的操作步骤是什么？注意事项是什么？
答：操作步骤：放置好显微镜；调节好光源；低倍镜观察，高倍镜观察，油镜观察；清洁显微镜；还原显微镜。
注意事项：
5.制备细菌染色标本片时应注意哪些事项？
答：1）接种环要充分灭菌，避免带入新的细菌
2）加蒸馏水时，应用接种环取少量蒸馏水于载玻片上，否则自然干燥的时间会过长
3）钓菌时，试管口要在酒精灯附近，避免新的细菌进入菌种内
4）火焰固定时，热干燥的时间不宜过长，以不烫手为度
5）水洗时，先用蒸馏水冲洗平放的玻片，再冲斜放着的玻片
6）制片完成后，要待玻片完全干燥后才能油镜进行镜检
6.图片固定的意义何在？固定时应注意什么问题？
答：意义：a。除去抹片的水分，涂抹材料能很好的贴附在玻片上，以免水洗时易被冲掉
b.使抹片易于着色或更好的着色，因为变性的蛋白质比非变性的蛋白质着色力更强
c．可杀死抹片中的微生物
固定时注意事项：1）火焰固定时只略作加热进行固定，但不能太热，以不烫手为度，同时加热时间和加热温度也应控制好，以保持细胞形态结构的完整性。2）化学固定时，若作姬姆萨染色就不用火焰固定，而用甲醇固定。
7.细菌染色的原理是什么？
答：细菌的等电点较低，约在pH2—5之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易于带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或红色。
8.试述细菌革兰氏染色法的步骤及结果。
答：1）加草酸铵结晶紫染色液1—2min ，水洗； 2）加革兰氏稀碘液1—3min， 水洗；
3）加95%酒精脱色0.5min ，水洗； 4）10倍稀释石碳酸复红液复染10—30s，水洗
5）结果蓝紫色：革兰氏阳性菌红色：革兰氏阴性菌
9.试述培养基制备的原则和要求。
答：原则：
要求：1）培养基必须含有细菌生长所需要的营养物质；2）培养基的材料和装培养基的容器应没有抑制细菌生长的物质；3）培养基的酸碱度应符合细菌生长的要求；4）所制培养基应该透明；5）培养基必须彻底灭菌，不得含有任何活的细菌。
10.试述普通肉汤培养基的制备方法及其用途。
答：成分：牛肉膏3—5g；蛋白胨10g；氯化钠5g；水1000mL；
用途：1）用作细菌的液体培养；2）检查细菌的发育状况，以及形成的沉淀物、菌膜、菌环等；3）制作固体培养基的基础。
11.试述普通琼脂培养基的制备方法及其用途。
答：成分：普通肉汤培养基1000mL；琼脂20—30g
用途：1）细菌的分离培养、纯培养；2）观察菌落形状及保存菌种；3)制作特殊培养基的基础。
12.细菌分离培养的目的是什么？何为纯培养？
答：目的：由于细菌感染而致病的各种标本及带菌者所需检查的各种标本，往往并非单一的细菌，而且混有其它非致病菌，因此，当对此标本做出细菌鉴定时，就必须从标本中分离出致病菌。
纯培养：只在单一种类存在的状态下所进行的生物培养。纯培养技术：对已得到的可疑病菌进行细菌鉴定及菌种保存等培养成为纯培养技术。
13.培养皿培养时为什么要倒置？
答：1）便于操作；2）使接种的细菌在培养皿上生长良好；3）防止空气中的细菌进入培养皿中造成污染；
4）防止蒸发的水分形成水珠掉在培养皿上破坏菌落。
14.细菌分离培养的方法有哪些？常用什么方法？
答：细菌分离培养的方法有划线分离培养法、斜面移植法、肉汤增菌培养等。常用方法是划线分离培养法。
15.细菌菌落特征怎样描述？
答：大小、表面性状、形状、边缘、隆起度、颜色及透明度、硬度、溶血。
16.在挑取固体培养基上的细菌做平板分区划线时，为什么在每区之间都要将接种环上剩余的细菌烧掉？ 答：目的是为了达到使被检材料适当的稀释，以获得单一的菌落，防止发育成菌苔，能更好的鉴别菌落的性状。
17.革兰氏染色的关键步骤是什么？
答：酒精脱色，过度时，革兰氏阳性菌易被误认为是革兰氏阴性菌；时间过短时，革兰氏阴性菌易被误认为革兰氏阳性菌。
18.当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？
答：先做一个预实验，取已知革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌进行革兰氏染色，如实际染色结果与理论结果相等，则用这个实验参数（染色、脱色、水洗、复染时间），否则应改变实验参数再试验，直到在当时的实验环境时的实验参数可以确保染色正确，然后再去染未知菌。
19.解释所做生化实验的原理？作生化实验时有哪些注意事项？
答：原理：微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。细菌生化实验就是检测细菌是否利用某种物质并进行代谢及合成产物。判断和确定细菌合成和分解代谢物的特征，借此来鉴定细菌的种类。 理论依据：不同的细菌含有不同的分解代谢酶，具有不同的分解代谢途径，对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同。
注意事项：1）纯培养物方可进行生化实验；2）接种时避免交叉污染；3）标记必须准确；4）试剂可用标准菌株作对照。
20.在圆纸片法中判定细菌对药物敏感程度的方法是什么？
答：根据药物纸片周围有无抑菌圈及其直径大小来判断该菌对各种药物的敏感程度，分为高度敏感、中度敏感、低度敏感和不敏感。不同敏感程度在指导临床用药时可加剂量。
21.多杀性巴氏杆菌的培养特征及生化特征有哪些？
答：培养特征：在鲜血平板上生长良好，菌落呈淡灰色、圆形、湿润、呈露珠样小菌落，无溶血。在普通培养基上生长不良，在麦糠凯培养基上不生长。
生化特性：不分解乳糖、吲哚试验阳性、硫化氢阳性等。
22.结合微生物实验室诊断要求简述动物尸体剖解的注意事项
答：1)怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解；2）有针对性的采集病料；3）做好个人的防护和环境消毒工作；
4）盛装病料的容器要求无菌；5）无菌操作；6）病料必须注明名称；7）必须低温保存，及早送检；8）动物尸体必须妥善处理（深埋、焚烧）
23.简述瑞氏染色和姬姆萨染色方法及结果
答;瑞氏染色法：1）组织触片或推片，自然干燥；2）在干燥的组织涂片上加瑞氏染液染1—3min，勿使染液干；3）直接滴加与瑞氏染液等量的蒸馏水到涂片上，吹气混匀，继续染3—5min，水洗，干燥，镜检。 姬姆萨染色法：1）组织涂片，自然干燥；2）置于无水甲醇中固定3—5min；3）置于新配置的姬姆萨染液中（一份染色液原液加9份中性蒸馏水）染30—60min（过夜也可）；4）水洗、干燥、镜检；5）结果：细菌呈蓝青色，组织、细胞呈其它颜色，视野呈淡红色。
24.多杀性巴氏杆菌在纯培养和病料组织中的形态特征有什么差别？检查时各用什么方法？
答：在纯培养中的形态是淡灰色，圆形，湿润，露珠样小菌落，菌落周围无溶血圈，检查时用革兰氏染色法。在病料组织中形态：呈典型的两级着色，检查时用姬姆萨染色、美蓝染色或瑞氏染色。
25.鸡胚接种时应注意哪些事项？
答：1）操作过程应在无菌条件下进行；2）照蛋时，要注意避开头部和血管划圈；3）接种时要将鸡蛋注
射部位消毒，再打孔注射；4)吸取尿囊液时，避免使血管、卵黄破坏而污染尿囊液；5）去壳时，剪刀、镊子要消毒，注射后用石蜡封闭小孔。
26.常用鸡胚接种方法有哪些？
答：绒毛尿囊腔接种法、绒毛尿囊膜接种法、人工气室法、卵黄囊内接种法、羊膜腔内接种法。
27.病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原体反应？为什么？
答：病毒凝集红细胞不是一种抗原体反应，目的是检测病毒的存在。原理是病毒表面血凝集与鸡红细胞表面糖蛋白受体结合，产生凝集反应。
28.HI实验是不是特异的抗原体反应？为什么？
答：HI实验是特异的抗原体反应，HI实验是特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝红细胞的能力，从而抑制血凝现象。
29.血凝试验中为什么要加补充液？
答：补充液是代替抗体，加补充液是为了使各孔的溶液量相等，这样方便和准确的进行比较。
30.为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？
答：在加病毒液时，从左至右的浓度依次降低。在加红细胞悬液时，若不反向加，操作时会将高浓度的触到低浓度的孔，影响到实验结果，所以要反向加。
31.血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义。
答：通过空白对照，更准确的进行实验结果比较，是结果判定的依据。
血清对照：检测血清有无影响；红细胞对照：检测红细胞有无血凝；病毒对照：检测病毒是否能引起血凝现象。
