微生物标本采集操作规程 美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）
1 概述
临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。下呼吸道分泌物经过上呼吸道排出时常受该处的正常菌群的污染。下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。上呼吸道感染临床诊断一般不难。细菌学检验能明确感染病原及药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。 2 物品准备与申请
2.1 领取清洁痰盒，推荐到采购办领取专门痰盒。请拿检验申请单到病房二楼细菌室登记领取。细菌室周一到周六上午正常上班。其他时间如中午、夜班、节假日请到生化室联系。
2.2 填写检验申请单。用钢笔填写，字迹清楚，填写完整。填写内容包括：患者姓名、性别、年龄、科别、病区、床号、住院号、临床诊断、送检目的、申请医生及送检时间。 3 采集指征 痰液标本是临床微生物学检验最常见的的标本，但不是下呼吸道感染的最佳标本。有下列体征之一，应进行痰培养：
1 （1）咳嗽 咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状。（2）咯血 包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。（3）呼吸困难 呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。（4）发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或CRP明显增高。（5）胸部影像学检查提示有感染可能。 4 采集方法
4.1 自然咳痰法 以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷（不用牙膏）清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。尽可能在用抗菌药物之前采集标本。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，标本量应≥1ml。咳痰困难者可用雾化吸入加温至45°C的10% NaCl水溶液，使痰液易于排出。对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。
4.2 支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法，均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。其中气管穿刺法仅用于昏迷患者。
4.3 小儿取痰法 用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
2 5 标本运送和验收
5.1 标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存≤2h，4℃冰箱保存≤24h。规定每日1次。
5.2 下呼吸道细菌学检验标本验收与拒收见下：（1）呼吸道有大量的正常菌群存在，咽拭子、咳痰、吸出的分泌物厌氧菌培养无意义。（2）申请单填写应完整无误。标本标识必须唯一，并与申请单相符，未标采集时间、部位或检验要求等拒收。（3）痰标本呈水样或唾液样，有明显食物残渣、灰尘纸屑者拒收。（4）涂片白细胞和鳞状上皮细胞计数：白细胞＜10／低倍镜或鳞状上皮细胞＞25／低倍镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。（5）送检时间超过2h拒收。（6）同时同部位或同一天两份相同检测的标本，应与申请医生协商处理。
脓液标本采集操作采集方法
4.1 开放脓肿 用无菌盐水或70％酒精擦去表面渗出物，用拭子深入溃疡基底部或边缘部，采集两个拭子，分别做培养和革兰染色，也可对渗出物做需氧培养。开放病灶不能做厌氧培养。
4.2 闭锁脓肿 不能用拭子，要消毒脓肿表面皮肤后用无菌注射器抽取，刺入无菌橡皮塞中送检。
4.3 烧伤伤口 清创，出现渗出物后用拭子用力采集，仅做需
3 氧培养。也可送组织标本。
4.4 脓疱或水疱 酒精消毒，干燥，用针头（小儿用23号针头）挑破脓疱，用拭子采集脓疱液和基底部标本。 4.5 注意事项：对大多数开放伤口，采集前应先清创，去除表面菌群。除非有渗出物，干燥、结痂伤口一般不做培养。闭合脓肿应取穿刺物和脓肿壁标本。开放脓肿处理同开放伤口。不要仅仅送检脓液，应在病灶活动区域或基底部采集标本，最好是组织标本 生殖道标本采集操作 采集方法 应由临床医师采集，收集于无菌试管内送检。淋球菌检查时，不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深取样送检，要避免受阴道分泌物污染。
4.1 男性标本: (1) 如疑为急性淋病奈瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗龟头部后,以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒剂消毒后,挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取,立即送检,或以专用的细拭子插入尿道口1～2 cm ,旋转采取。(2) 如疑为前列腺炎、精囊炎或慢性淋病奈瑟菌感染应由医师按摩前列腺,以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。
4.2 女性标本: (1) 成年妇女自宫颈采取标本,应在扩阴器的支持下,选取有炎症或分泌物部位,先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物,再用另一拭子取宫颈分泌物送检。如做厌氧
4 或真菌培养应另外采取标本。如怀疑淋球菌感染，应同时另外采集一份肛门拭子标本。(2) 如未成年幼女疑患性传播疾病时,不应使用扩阴器,应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。
眼、耳、鼻、喉标本采集操作 4 采集方法
4.1 眼结膜标本 预先沾湿拭子，在结膜上滚动采集标本。标本在15min内送达实验室。
4.2 眼角膜标本 在麻醉下，用刮勺在溃疡或创伤边缘刮取碎屑，立即送检。眼部感染所获得的标本量很少，建议医师取样后直接接种在培养基平板上培养。
4.3 口咽部标本
先用一个拭子揩去溃疡或创面表浅分泌物，第二个拭子采集溃疡边缘或底部，常规培养≤2h送检。 4.4 患有外耳炎者，需要深部拭子，因为浅表拭子可能遗漏链球菌引起的蜂窝织炎。
4.5 鼻标本 用一根无菌棉拭子伸进一侧鼻孔约2.5cm，与鼻黏膜接触，轻轻旋转拭子，蘸取黏膜上分泌物，缓慢取出，直接送检。
4.6 注意事项:（1）眼、耳、鼻、喉标本采集后应立即送检，防止干燥，禁止冷藏。
（2）应注明标本来源如眼标本注明是眼睑、结膜还是角膜等，并注明左眼还是右眼。结膜标本最好取双眼、双份，每
5 眼取一份用于培养，一份做革兰染色。（3）不建议用鼻咽拭子标本做常规细菌培养。（4）眼、耳、鼻、喉拭子标本一般不能做厌氧培养。
