临床微生物学标本采取和处理的规范化要求
正确的采取、处理与运送用于细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键。标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不当将严重影响检验结果，给临床以误导，延误对患者的正确治疗。为此，我们提出初步的参考意见，并希望在实践中不断完善。
一、血液细菌培养标本的采集和处理
临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。
1．采集方法：静脉采血，以无菌操作方法抽取血液后，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中，再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。
2.采血时间以及血培养份数：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，用药前24小时内采集2～3次血液标本，可使细菌检出率高达99%。对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1小时采血，亦可在寒战或发热后1小时采集血液标本。特殊感染患者采血培养时应遵循以下原则： （1）可疑急性发热性菌血症、败血症患者：应在使用抗菌药物之前，在24小时内从不同部位采集2～3份血液标本培养。
（2）可疑细菌性心内膜炎患者、感染性心内膜炎患者：在1～2小时内采集3份血标本培养，如果24小时后阴性，再采集两份血标本培养。
（3）不明原因发热患者：先采集2～3份血标本，抽血间隔60 min，24～36小时后体温升高之前，再采集2份血标本进行培养。因为1次血培养不足以说明问题，可能会遗漏阳性结果。
（4）可疑菌血症但血培养持续阴性时；应改变血培养方法，以获得罕见或苛养的微生物。
（5）在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎，需马上做抗菌治疗；或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者，应立即从两臂分别取2份标本。 3.采血部位：采血部位通常为肘静脉。疑为亚急性心内膜炎的患者，以肘动脉或股动脉采血为宜。疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓。多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。要避免从血管插管内取血，因插管常被污染，其培养结果不能反映真实情况。在不同部位取血，2次分离出同样菌种才是确定病原菌的有力证据。采血时要求严格无菌操作，防止皮肤正常菌群污染。
4.采血量：采血量与血培养的检出率相关，所以采血量一定要足够。成人一般为8～10ml/瓶，新生儿与婴幼儿为1～5 ml/瓶， 骨髓采血量为1～2ml/瓶。 5.标本运送与保存：含血样的培养瓶应立即送往实验室；不能及时送检的标本，应将其放在室温，切忌冰箱存放，因为某些苛养菌可在低温环境中死亡，而使培养阳性率下降。
二、下呼吸道分泌物(痰培养)的标本采取和处理
下呼吸道分泌物(痰)的细菌学检查对病原学诊断起着重要作用，但痰标本的质量往往难以保证，造成病原学诊断和实际引起感染的病原菌脱节，直接影响抗菌药物的应用、甚至耐药菌的出现或流行。痰标本的细菌学检验地带网检查应注意如下几个问题。
1.标本的采集：痰液标本最好在应用抗菌药物之前采集，以深咳晨痰最好，主要有自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法、小儿采痰法和气管穿刺法等。
(1) 自然咳痰法：为最常用的采集痰液方法。留取标本前，嘱咐患者用清水漱口数次，然后将痰吐入无菌带盖的痰杯中。对无痰或少痰的患者可采用雾化吸入加温至45℃的10%NaCl水溶液，使痰液易于排出。对咳痰少的幼儿，可轻压胸骨上部的气管，促进痰液的排出。
(2) 气管穿刺法：仅用于昏迷患者，由临床医师进行操作，主要用于厌氧培养。
(3) 支气管镜采集法：用气管镜在肺部病灶附近用导管吸引或者用支气管刷直接取材，患者不易接受，故不常用。
(4) 胃内采痰法：无自觉症状的肺结核患者（尤其婴幼儿）不会咳嗽，有时将痰误咽入胃中，可采集胃内容物做结核分枝杆菌培养。清晨空腹时将胃管插入患者胃内抽取胃液送检。
(5) 小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子深入咽部，小儿收到刺激咳嗽时，可咳出肺部或气管分泌物粘在拭子上。
2.标本的运送与保存：痰液标本采集后应立即送检，以防止某些细菌在外环境中死亡。做结核分枝杆菌和真菌培养的标本不能及时送检时，可放4℃保存，以免杂菌生长。
三、尿液细菌培养标本的采集和处理 尿液的细菌培养检查对于膀胱和肾脏感染的及早发现和病原学诊断很有价值。对于尿道、前列腺以及内、外生殖器炎症的诊断也有一定价值。
1.标本收集时间：需在应用抗菌药物之前或停用抗菌药5 d之后留取尿液标本；尿液在膀胱内应停留6～8h以上，使细菌有足够时间繁殖。最好留取早晨清洁中段尿标本。 2.标本收集方法：
(1)清洁排尿法：女患者首先用肥皂水或碘伏清洗会阴部及尿道口，再用清水冲洗，擦干并排出前段尿液后，用无菌容器接取中段尿10～20ml；男患者应翻转包皮冲洗，用碘伏消毒尿道口；婴儿消毒其阴部后，将无菌小瓶直接对准尿道口接取尿液；均加盖立即送检。
(2)膀胱穿刺法：为避免尿道正常菌群的污染，收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。尤其做厌氧菌检查时必须采用膀胱穿刺法。穿刺时膀胱应充盈，皮肤严格消毒后用装有19或20号针头的注射器在耻检验地带网骨联合距脐1/3处穿刺。膀胱穿刺的适应症有：①有尿道感染的临床症状，但中段尿培养细菌数很低，而又难以确定感染源者。②婴幼儿、新生儿、不能用导管者。③怀疑有厌氧菌感染时。 (3)肾盂尿采集法：若取左右两侧肾盂尿，应请泌尿科医生采取，左右侧的标本要标记明确，以免出现错误。
(4)对用封闭式引流装置的留置导尿患者留取尿液标本培养时，用适当的消毒剂严格消毒引流管和导尿管连接处的管壁，用装有21号针头的注射器穿刺导尿管壁吸取尿液。不可打开导尿管和引流管连接处收集标本，培养用的尿液标本也不能从引流袋中留取。
(5)膀胱镜检查、输尿管插管或逆行肾盂造影时，收集的尿液可用来做细菌培养。 (6)做病毒学检测时用容器收集清洁的标本即可，不需特殊方法收集。标本中加入抗生素可抑制细菌的过度生长，且标本需冷藏。
3.标本的运送和保存：尿液标本采集后应立即送检、及时接种，室温下保存时间不能超过2小时，4℃冷藏时间不能超过8小时，否则尿液细菌迅速繁殖，使尿中细菌计数不准确。但疑为淋病奈瑟菌感染患者的标本不能冷藏保存。
四、粪便标本微生物学检查的质量要求
1.采集方法：粪便标本多采用自认排便法，特殊情况下可采用直肠拭子法。 （1）自然排便法：患者用药前自然排便后，采集有脓血、黏液部分粪便2～3克；外观无异常的粪便应从粪便不同部位取材；液体粪便取絮状物，盛于无菌容器或保存液中送检。 （2）直肠拭子法：对于不易获得粪便或排便困难的患者，可采用直肠拭子法采集。将拭子前端用无菌甘油或盐水湿润，然后插入肛门约4～5cm（幼儿2～3cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦去直肠表面黏液后取出，盛入无菌试管或保存液中送检。
2.标本保存和运送：粪便标本应立即送检；如不能立即送检，放入Cary-Blair运送培养基或pH7.0的磷酸盐甘油（0.033mol/L PBS与等体积的甘油混合）中运送和保存。标本置密封好的小瓶中，记录姓名、日期、标本号、及时送检，一般不长于2小时。
五、生殖道标本的采集和处理 1.男性标本：
(1)如疑为急性淋病奈瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗龟头部后，以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒剂消毒后，挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取放入无菌试管中，立即送检，或以专用的细拭子插入尿道口2～3cm，旋转采取。 (2)如疑为前列腺炎、精囊炎或慢性淋病奈瑟菌感染应由医师按摩前列腺，以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。 2.女性标本：
(1)成年妇女自宫颈采取标本，应在扩阴器的支持下，选取有炎症或分泌物部位，先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物，再用另一拭子取分泌物放入无菌试管中立即送检。如做厌氧或真菌培养应另外采取标本。
(2)如未成年幼女疑患性传播疾病时，不应使用扩阴器，应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物放入无菌试管中立即送检。
六、胸腹水、脑脊液标本的采集
1.采集方法：（1）脑脊液多由临床医生采集，通过腰穿法无菌操作采集脑脊液3～5ml，盛于无菌试管或培养瓶中。
（2）胸腹水均由医师以无菌手续穿刺取3～5ml，必须应用带盖的无菌容器，立即送检。
2.标本运送与保存：收集到的脑脊液标本应立即送检，15分钟内送到实验室，同时注意保温，不可置于冰箱保存，否则会使一些细菌死亡（如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌），影响细菌的检出率。
七、对不合格标本的处理
微生物室对于下列标本收集不符合规定的标本将予拒收，并通知临床，按标本要求复送：
1.申请单项目与标本不符。
2.申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。 3.标本已有明显的污染迹象(如开塞)。 4.标本量过少或已明显干燥。
5.尿培养应留样于无菌试管或带盖无菌杯中。（不合格标本大部分是因为留在尿常规杯中）。尿培养标本不合格者，多以污染而致三种以上杂菌生长居多。特别需杜绝的是一些患者见无菌容器太小直接留取中段尿有难度，于是把小便拉在痰盂等大容器中，再把小便倒在无菌容器中送检。
6.痰培养应留样于带盖无菌痰杯中。（不合格标本大部分是因为留在尿常规杯中）。痰培养标本不合格者，多以口水居多或口腔污染严重。挑取痰标本直接涂片镜检，WBC＜10/LP，上皮细胞＞25/LP不适合做细菌培养。
7.大便培养标本不合格者，多以送检时间过长导致标本干燥无法培养，故大便标本须及时送检（1小时内，最好在上班时间直接送细菌室检验）。
